用LIPO3000向PK-15细胞中转染siRNA
以24孔板为例。
1 转染前一天细胞消化计数,之后细胞在0.5 ml不含双抗的完全培养基中正常生长。
2 细胞的密度为30%-50%适宜。(注意:根据转染后细胞检测时间的长短决定细胞密度,如果转然后需要很长时间去检测,则细胞密度适当降低,以避免细胞过度生长导致存活性降低。)
3 第二天(24到36小时)每孔转染方式如下:
A 将20 pmol siRNA溶于150 微升Opti-MEM无血清培养基中。
B 将1 微升lipo2000溶于150 微升Opti-MEM无血清培养基中,混匀室温放置5 min。
C 将A、B混合放置5 min。
4 转染期间,将24孔板中的培养基换成无血清培养基,每孔400 微升。将C管Mix加入到每孔中,6小时后换成有血清培养基。