PCR培训班考试题

一.填空（每空0.5分，共15分）

1. 为加强医疗机构临床基因扩增实验室规范化管理，卫生部于2010年发布《医疗机构临床基因扩增实验室管理办

法 》，北京市卫生局为做好实验室备案工作，于2012年发布了《北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室技术审核暂行规定》。（2019）

2. 北京市卫生局及各区县卫生局负责所辖行政区域内地方医疗机构临床基因扩增检验实验室的备案和监督管理工

作。其中备案的技术审核工作流程主要包括：申报、 资料审核 、 现场验收 、 整改 、 通知实验室资料审核结果。医疗机构的医学检验科应当设有 临床细胞分子遗传学 专业诊疗科目。备案的临床基因扩增检验实验室参加医疗机构的年度校验。（2019）

3. 临床基因扩增检测的分析中质量保证关键内容包括： 室内质控 和 室间质评 。其中前者监测和控制的

是实验室测定的 重复性 ，而后者则通过对不同的实验室测定结果的比对而评价实验室测定的 准确度 。（2019）

4. DNA双螺旋结构的特点是：螺旋中的两条链为 反向平行 ，其中一条链的方向为 5’-3’ ，另一条链的方向为 3’-5’ 。（2019）

5. 核酸包括两种类型： 脱氧核糖核酸 和 核糖核酸 ，二者的主要区别为：前者由 ATCG 四种碱基组成，而后者由 AUCG 四种碱基组成。（2019）

6. 根据遗传中心法则，遗传信息的流动方向为 DNA  RNA  蛋白质 。（2019） 7. 普通临床基因扩增检验实验室一般包括下面四个分区： 试剂储存和准备区 、 标本制备区 、 扩增区 、 扩增产物分析区 。（2019）

8. 提纯的核酸样品可根据 OD260 波长的光吸收值算出其含量，通过计算 260/280 的比值计算出其纯度。（2019）

9. 临床基因扩增实验室检测用的试剂应当经 国家药监局 批准。（2019）

10. cfDNA的和中文名称是 细胞游离DNA ，ctDNA的中文名称是 循环肿瘤DNA 。（2019）

11. 在PCR前，为保护操作者和样本，手工处理样本应该在样本制备区的 生物安全柜 中进行，并使用

带滤芯 的移液吸头进行样本操作。（2020）

12. 医疗废物垃圾袋结扎采用 “鹅口颈”套扎 结扎形式。（2020） 13. 锐器盒容积达到总体积的 3/4 时需要更换。（2020）

14. 核酸检测中，全血样本采集一般使用 EDTA 或 枸橼酸盐 抗凝，不使用 肝素 抗凝。（2020）

15. 荧光定量PCR使用的Taqman探针两端标记有 报告荧光R 5’ 基团和 荧光 粹灭Q 3’ 基团。1

（2020）

16. 新冠病毒核酸检测应该在生物安全 Ⅱ 级实验室开展，同时采用生物安全 Ⅲ 级实验室的个人防护。（2020）

17. PCR的基本反应过程包括 变性 、 退火 、 延伸 。（2020） 18. DNA/RNA的紫外吸收在 260 nm附近有最大吸收值。（2020）

19. 核酸的基本结构单位是： 核苷酸 ，其组成包括 碱基 、 核糖或脱氧核糖 和 磷酸 。

（2020）

二．是非题（在你认为正确的句子后面打√，错误的后面打×，每题1分，共15分）

1. DNA双链中，碱基A-T之间以三个氢键相连，G-C以两个氢键相连。 （ × ）（2019） 2. 与细胞学初筛相比较，HPV核酸检测初筛具有更高的敏感性。 （ √ ）（2019）

3. 使用有防“污染”作用的尿苷糖基酶（UNG）的PCR试剂盒，该酶可以降解含有UTP的扩增产物。

（ √ ） （2019）

4. DNA变性是指在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中的所有共价键同时

也受影响。 （ × ）（2019）

5. 自制室内质控品时，应对质控品的均匀性和稳定性进行评价。 （ √ ）（2019）

6. 定量PCR与定性PCR测定原理的最主要的区别点在于前者的测定点在PCR的指数扩增期，而后者多为扩增平台

期。 （ × ）（2019）

7. 处理PCR标本时，在没有生物安全柜的情况下，可用超净台操作。 （ × ）（2019） 8. 临床检验中的系统误差通常表现为质控物测定结果的SD增大。 （ × ）（2019） 9. 扩增管没有盖好会造成PCR反应液热蒸发，直接影响结果，但不会成为一个污染源。

（ × ）（2019） 10. 核酸是极性化合物，溶于水， 不溶于乙醇等有机溶剂。 （ √ ）（2019） 11. 核酸的解链温度（Tm）与G+C含量有关，G+C含量愈大，Tm愈低。 （ × ） （2019） 12. 无法参加室间质量评价计划时，可以用室内质控替代。 （ × ）（2019） 13. 一般进行HCV-RNA 检测时宜采用EDTA抗凝血，不宜采用肝素抗凝。 （ √ ）（2019） 14. 以次氯酸为主要成分的清洁剂在配制后可以长期使用。 （ × ）（2019） 15. 质量管理体系的要素包括质量方针、质量目标和质量指标。 （ √ ）（2019） 16. 核酸的复制是由3’-5’方向进行。 5---3 （ × ）（2020） 17. 核酸的解链温度（Tm）与G+C含量有关，G+C含量愈大，Tm愈高。 （ √ ）（2020） 18. 标本差错率和实验室布局的合理性均为实验室质量体系监控指标。（ √ ）（2020）

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19. 实验室质量体系文件无统一格式，无标准文件，应切合实际，怎么做怎么写。（ × ）（2020）有标准文件 20. 进行新冠病毒核酸检测时，采集鼻咽拭子标本可使用棉签。 （ × ）（2020）植绒拭子

21. 在常规应用前，可由制造商对实验室未加修改而使用的已确认的检验程序进行验证。

（ × ）（2020）

22. DNA在中性或弱碱性溶液中易水解，但在酸性溶液中较稳定，RNA在碱性溶液中稳定。（ × ）（2020） 答案：在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定，DNA在碱中变性，但不水解，RNA水解。

23. DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。 （ √ ）（2020） 24. DNA微溶于水，可溶于有机溶剂。 （ × ）（2020）溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂

三．单选题（请将所选答案填写在题后的括号中，每题1分，共25分）

1.PCR技术的发明人是： （ C ）（2019） A.Watson J.D.; B. Crick F. H.C.; C.Kary Mullis; D. Rosalind Franklin .

2. 二级生物安全柜能对以下哪些进行防护： （ D ）（2019） A.人员 B.实验品 C.环境 D.以上都是

3. 在生物界尚无充足证据的信息流动过程的是 （ A ）（2019） A．蛋白质→RNA B．RNA→DNA C．DNA→DNA D．DNA→RNA

4.核酸提取纯化中，RNase潜在污染源是： （ D ）（2019） A.实验室环境； B.实验用品如吸头、离心管等； C.实验人员的手； D.以上都是

5. 生物安全水平的级别共分为几个等级 （ D ）（2019） A．1个 B．2个 C．3个 D．4个 6.有关于荧光定量PCR方法，下述哪一条是错误的？ （ A ）（2019） A.在扩增的指数期定量； B.采用内标和外标方法均可； C.可采用Taqman 探针； D.在扩增的终点测定定量

7. 在选择开展临床检验项目时，应首先考虑： （ B ）（2019） A.临床有效性和分析有效性； B. 检测精密度和检测准确度；

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C.临床有效性和检测精密度； D. 分析有效性和检测准确度 8 以下哪项有利于DNA的保存： （ A ）（2019） A. 加入EDTA螯合钙离子，去除核酸酶的活性； B. 加入少量DNase； C. 溶于pH 3.0溶液； D. 加入少量RNase 9. 实验室的清洁工作应在以下情况下进行： （ A ）（2019） A. 每次实验后 B. 文件规定清洁时间 C. 实验室发生污染时 D. 以上都是

10.荧光定量PCR检测过程中，基线漂移的可能原因有： （ D ）（2019） A.蒸发； B.探针水解 C.相邻荧光通道干扰 D.以上都是

11.将基因扩增检验实验室的产物分析区设置为负压状态，目的是： （ B ）（2019） A.防止有生物传染危险的样本逸出； B.防止扩增产物从该区逸出； C.防止该区灰尘的逸出； D.为了生物安全的目的

12.常用RNase抑制剂是 （ B ）（2019） A. 乙醇； B. DEPC； C. 异丙醇; D.精胺

13. 真核生物染色体DNA主要以下列哪种形式存在 （ D ）（2019） A. 环状单链分子 B. 线性单链分子 C. 环状双链分子 D. 线性双链分子

14. TaqMan探针采用的是 （ A ）（2019） A．荧光标记的探针 B．生物素标记的探针 C．同位素标记的探针 D．SYBR Green荧光染料

15. 最大量程为200ul 的微量移液器，显示读数为020，实际的吸液容量值为：( C ）（2019） A． 0.2 ul B． 2ul C．20 ul D．200 ul

16.有关核小体的错误叙述是： （ D ）（2019） A．核小体是染色体的基本单位 B． DNA和组蛋白共同构成核小体 C．DNA和组蛋白H1构成核小体连接区 D．RNA和组蛋白共同构成核小体

17.基因突变的实质是： （ A ）（2019） A．染色体上的DNA序列变化了 B．染色体上的DNA变成了RNA

C．染色体上的DNA变成了蛋白质 D．染色体上的DNA高级结构发生了局部改变 18. 如果一个PCR反应体系中加入模板200个，经过30个循环后扩增产物的数量将达到 （ C ）（2019）

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A. 200×30×2 B. 200×30 C. 200×230 D. 200×302

19.Sanger测序体系与PCR反应体系的主要区别是前者含有： （ B ）（2019） A.模板 B. ddNTP C. DNA聚合酶 D. 引物

Sanger测序体系与PCR相同点：都是基于碱基互补配对原则，在DNA聚合酶作用下的聚合反应。 不同点：

1 反应过成不同：PCR是引物对扩增，测序则是单引物扩增。 2 反应成分不同：PCR是需要4种脱氧碱基，测序则有ddNTP

20.分子杂交试验不能用于： （ C ）（2019） A.单链DNA分子之间的杂交 B.单链DNA与RNA分子之间的杂交 C.抗原与抗体分子之间的结合 D.双链DNA与RNA分子之间的杂交

21.在Sanger基因测序技术中所使用的酶是: （ A ）（2019） A.DNA聚合酶 B. RNA聚合酶 C.DNA连接酶 D. DNA拓扑酶 22. 双链DNA中的碱基对有： （ D ）（2019）

A． A-U B． G-T C． C-A D． T-A 23. 下列四个DNA 片段中含有回文结构的是 （ D ）（2019） A. GAAGAA B. TGGAAA C. GAAAAG D. GAATTC

24. 核酸分子中储存遗传信息的关键部分是： （ D ）（2019） A. mRNA B. tRNA C. rRNA D. DNA

25. 核酸检测探针的标志性特征是： （ A ）（2019） A．一小段已知序列的单链核酸； B. 一小段未知序列的单链核酸； C. 一小段已知序列的双链核酸； D. 有同位素或非同位素标记物。

作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件：①应是单链，若为双链，必须先行变性处理。

②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。

26. 核酸分离纯化的目的是： （ D ）（2020）

A. 除去PCR抑制物 B. 增加靶核酸浓度，使之达到PCR测定范围

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C. 增加样本均一性，保证测定精密度和重复性 D. 以上都是 27. mRNA约占总RNA的百分数为： （ A ）（2020） A. 5％ B. 10％ C. 15％ D. 20％

28. 分子检测对标本采集容器的要求是： （ E ）（2020）

A. 密闭 B. 一次性 C. 无DNase和 RNase D. 无菌 E. 以上均是 29. 关于基因扩增检测实验室分区，以下说法不正确的是：（ D ）（2020）

A. 外周血游离DNA标本制备可与细胞/组织标本制备区共用；B. 须注意实验室空气流向；分的通风换气； D. 缓冲间不是必需的； E. 传递窗不是必需的 30. “无基因”或“无核酸”概念是指：（ E ）（2020）

A. 在基因扩增检测操作时，要注意防止因为扩增产物污染所致检测假阳性； B. 在基因扩增检测操作时，要注意防止因为标本间交叉污染所致检测假阳性； C. 每次检测后实验室内的充分通风及清洁； D. 实验室各区物品的专用； E. 以上均是

31. 商品试剂的性能验证的合格判断标准是：（ D ）（2020） A. 卫生行业标准； B. 国际标准；

C. 满足临床疾病的诊疗要求； D. 试剂盒说明书上所宣称的检测性能 E. 以上均是

32. L-J指控图的失控规则制定的依据是：（ B ）（2020）

A. 各实验室根据自身的情况具体确定； B. 统计学的“小概率事件”原理； C. 超过均值±3SD； D. 超过均值±2SD； E. 阴性质控品检测为阳性

33. 下列哪一种病毒遗传物质为RNA（ D ）（2020）

A. 乙肝病毒 B. 人乳头瘤病毒 C. 巨细胞病毒 D. 新型冠状病毒COVID-19 34. 以下在PCR反应中，对扩增产物的特异性起决定性作用的是：（ B ）（2020） A. 模板 B. 引物 C. dNTP D. 镁离子 35. 有关于荧光定量PCR方法，下述哪一条是错误的？ （ A ）（2020） A.在指数扩增初期定量； B.在扩增的终点定量； C.可采用Taqman 探针； D.采用内标和外标方法均可

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C. 实验室应有充

36. 在选择开展临床检验项目时，应首先考虑： （ B ）（2020） A.临床预期用途； B. 检测精密度和检测准确度； C.检测精密度； D.检测准确度

37. 一个PCR反应体系中起始模板量为500，经过30个循环后扩增产物的数量将达到 （ C ）（2020） A. 500×30×2 B. 5002×30 C. 500×230 D. 500×302 38. 对COVID-19疑似患者采样，需要（ C ）级生物安全个人防护装备（2020） A. Ⅰ B. Ⅱ C. Ⅲ D. Ⅳ 39. 手卫生分为（ D ）步（2020）

A. 4 B. 5 C. 6 D. 7 40. 除（ A ）外均可有效灭活新型冠状病毒（2020）

A. 氯已定 B. 56℃ 30分钟 C. 75%乙醇 D.含氯消毒剂 41. 在基因扩增检测中，全血或骨髓标本不能用肝素抗凝，原因是（ D ）（2020） A. 肝素是TaqDNA聚合酶活性的强抑制剂 B. 肝素对Mg++有络合作用 C. 经典的核酸提取方法很难去除肝素 D. 以上A和C 42. 下列哪种情况需对PCR检测项目进行方法学验证实验：（ D ）（2020）

A. 开展新项目前 B. 更换试剂品牌 C. 更换仪器 D. 以上全是

43. 在临床基因扩增检验中，弱阳性室内质控品发生失控，常见的原因有下述各项，除（ B ）外（2020） A. 核酸提取中的丢失、有机溶剂的去除不彻底、标本中扩增抑制物的残留等 B. 扩增仪孔间温度的不一致性 C. 扩增产物的污染 D. Taq酶和/或反转录酶的失活 44. PCR扩增检测采用内标，可以识别扩增检测的（ C ）（2020）

A. 假阴性 B. 假阳性 C. 假阴性、假阳性都可以预防 D. 假阴性、假阳性都不能预防 45. 在一个DNA分子中，如G所占摩尔比为17.2%，则A所占摩尔比为（ B ）（2020） A. 82.8% B. 32.8% C. 17.2% D. 65.6% 四.简答题(每题5分，共25分)

1. 简述什么情况下应进行性能验证？ (5分) （2019）

答：（1）在常规应用前，应由实验室对未加修改而使用的已确认的检验程序进行验证。

（2）任何严重影响检测系统分析性能的情况发生后，如仪器搬迁、设施、环境严重失控等。 （3）常规使用期间，定期做。

（4）启用新的检测系统：更换试剂、仪器、校准品溯源性改变

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2. 临床PCR实验室质量管理体系文件应包含哪些内容？(5分) （2019） 答：（1《质量手册》：质量方针和质量目标的声明。

（2）准则要求的程序和记录。

（3）实验室规定的文件和记录：为确保有效策划、运行并控制其过程。 （4）适用的法规、标准及其它规范文件。

3. 请简述完整的员工培训计划应包含哪些内容。(5分) （2019）

答：（1）培训所涉及的范围：仪器设备的使用、维护和校准。试剂方法原理。质量管理体系。相关法律法规，相关领域的新技术、新理念和新进展。实验操作技能等。 （2）如何培训：讲座，讨论，自学和参加培训班。

（3）培训的评估：书面考试，实验考核，讨论心得，论文，综述等。

4.感染性疾病的定量、定性检测，人基因组的基因型检测，对上述三类PCR检测的室内质控品的浓度水平和型别如何要求？(5分) （2019）

答：定量PCR检测的室内质控品的浓度：测定线性范围内的高、中、低三种浓度，型别：生物DNA/RNA参考标准品；

定性PCR检测的室内质控品的浓度：接近方法测定下限（2-4倍）的浓度，型别：生物DNA参考标准品； 人基因组的基因型检测的室内质控品的浓度： 型别：人类基因组DNA参考标准品。

5. 简述生物安全的概念、实验室生物安全水平的概念。 (5分) （2019）

答：实验室生物安全：为了避免微生物和医学实验室中有害或有潜在危害的生物因子对人、环境和社会造成的危害或潜在危害，而采取的防护措施（硬件）和管理措施（软件），达到对人、环境和社会的安全防护目的。 生物安全水平：根据实验室的工作性质及可能分离到的病原体等级进行安全防护水平的划分。 6. 什么是室内质量控制？(5分) （2020）

答：由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本实验室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠，可否发出报告的一项工作。包括三个方面的内容：测定前的质量控制、统计学质量控制、质量控制的评价。

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7. 请从气流方向、高效过滤器位置、保护对象、操作对象几方面比较生物安全柜、超净台、通风橱三种设备。(5分) （2020）

答：生物安全柜是一种负压净化工作台，气流方向是由外向内，高效过滤器位置在生物安全柜的顶部漏器上，保护对象为实验室和实验员。

超净台是正压送风，气流方向是由内向外，进风口在背面或正面的下方，工作台正面的金属网罩内是超级滤清器。保护对象为实验材料。

实验室通风橱气流控制由控制器与风阀来完成，气流方向是由外向内，过滤装置位于通风橱的上部。保护对象为实验室和实验员。

8.进行新冠病毒核酸检测的样本处理区试验台面发生样本溢洒时应如何处理？(5分) （2020）

答：样本在试验台面发生小面积溢洒时，应立即用吸水材料覆盖溢洒区域，覆盖范围要足够大，包括喷溅的最远处。然后用0.55%含氯消毒剂从外围向中心倾倒，直到吸水性材料全部湿润。消毒剂作用30分钟后，用镊子夹取溢洒物及吸水纸放入医疗废弃物收集器，利器及碎玻璃等放入利器盒，操作时注意不要扩大污染范围。再反复用新的吸水材料将剩余液体吸净。再次用0.55%含氯消毒剂对污染区域喷洒、擦拭消毒，用清水擦拭。最后对溢洒及处理结果进行记录和报告。

覆盖----消毒30min---丢弃----擦拭----再消毒---清水擦拭

9. 简述：荧光PCR定性项目检测时，弱阳性室内质控品出现假阴性失控的原因。(5分) （2020）

答：（1）核酸提取中的随机误差，如核酸提取中的丢失，有机溶剂的去除不彻底，标本中扩增抑制物的残留，所用耗材如离心管有PCR抑制物等。

（2）仪器的问题，如扩增仪孔间温度的不一致性，孔内温度与所示温度的不一致性等。 （3）试剂的问题，如Taq酶和/或反转录酶的失活，探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率等。

10. 定性PCR检验项目方法学性能验证参数一般包括哪些？(5分) （2020）

答：定性检测项目验证内容至少应包括测定下限、特异性、准确度（方法学比较或与金标准比较）、抗干扰能力等。

五.论述题(共20分) （2019）

1. 某一开展乙肝DNA定性检测的临床PCR实验室，参加盲样测试（包括三个阳性样本，两个阴性样本），该实验室做出的结果为5份样本全部阳性，工作人员将盲样全部阳性的结果确认后立即发出。第二天发现当天的室内质控结果也是全部阳性，并且当天的阳性率明显增高。请回答：

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（1）这样做是否正确？（4分） 答：不正确

（2）应该如何处理？（8分） 答：查找分析结果异常原因

（3）分析该情况产生的所有可能原因？ (8分) 答：第一，扩增产物的污染。

第二，临床标本的核酸提取过程中发生的样本间的交叉污染。 第三，喷等关键耗材污染 第三，试剂污染 第四，仪器故障

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