现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．９ 黄芪多糖对肿瘤模型小鼠红细胞免疫功能的影响 季宇彬，汲晨锋 （哈尔滨商业大学教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，生命科学与环境科学研究中心，黑龙江哈尔滨１５００７６） 摘要：本文研究了黄芪多糖对肿瘤模型小鼠红细胞膜结构组分和免疫功能的影响。黄芪多糖对Ｓ１８０小鼠腹腔注射给药７ ｄ，聚 丙烯酰睦凝胺电泳测定小鼠红细胞膜带３蛋白及血型糖蛋白Ａ的相对含量，采用试剂盒测定红细胞膜磷脂、胆固醇和唾液酸含量， 荧光偏振法测定红细胞膜流动性。应用流式细胞仪测定红细胞ＣＲ１数量；显微镜观察肿瘤红细胞花环率（ＤＴＥＲ１和Ｃ３ｂ受体花环率 （ｍ３ｃ Ｃ３ｂＲＲ）。黄芪多糖可以使Ｓ１８０小鼠红细胞膜磷脂含量升高０．１７ ｍｍｏｌ／Ｌ、胆固醇含量降低Ｏ．０６ ｍｍｏｌ／Ｌ；可以显著增加￥１８０ 小鼠红细胞膜带３蛋白及血型糖蛋白Ａ的相对含量（２．８８％、７．４０％）和增加０．２３ ｍｍｏｌ／Ｌ红细胞膜唾液酸含量；提高￥１８０小鼠红细胞 膜流动性；还可以使Ｓ１８０小鼠红细胞ＣＲ１数量增加５．９％，Ｓ１８０小鼠红细胞ＤＴＥＲ和ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ增加３．１３％和３．２６％ 黄芪多糖 可以改善肿瘤机体红细胞膜组分及结构，从而维持细胞膜的流动性，恢复红细胞的功能；还可以增加肿瘤机体红细胞ＣＲ１的数量， 增强红细胞ＣＲ１天然免疫活性，改善肿瘤机体红细胞免疫功能。 关键词：黄芪；多糖；肿瘤；小鼠；红细胞；免疫功能 文章篇号：１６７３．９０７８（２０１３）９－２０４２．２０４６ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ０ｎ Ｉｍｍｕｎｅ Ｆｕｎｃｔｉ０ｎ ０ｆ Ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｉｎ Ｔｕｍｏｒ Ｍｏｄｅｌ Ｍｉｃｅ ＪＩ Ｙｕ－ｂｉｎ，ＪＩ Ｃｈｅｎ－ｆｅｎｇ （Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆＮａｔｕｒａｌ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆＥｄＮｃａｆｉｏｎ；Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆＲｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈａｒｂｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｍｍｅｒｃｅ，Ｈａｒｂｉｎ １ ５００７６ Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆＡｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｎ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｎａｄ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｍｏｄｅｌ ｍｉｃｅ ｗａｓ ａｌｓｏ ｓｔｕｄｉｅｄ．８１８ｏ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｍａｄｅ ａｓ ｔｕｍｏｒ ｍｏｄｅｌ ｍｉｃｅ，ａｎｄ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｂｙ ｉ．ｐ．ｆｏｒ ７也ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅ ｅｒｙｔｈｒｏｅｙｔｅｓ ｉｎ ｍｉｃｅ ｖｅｎｏｕｓ ｂｌｏｏｄ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．Ｂａｎｄ ３ ａｎｄ ｇｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎ Ａ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ．Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ ｗｉｈｔ ｔｅｓｔ ｋｉｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ．ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ａｎｄ ｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ．ＤＰＨ ｄｙｅ ａｎｄ ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｌｕｉｄｉｔｙ．Ｅ￣ｅｔｈｒｏｃｙｔｅｓ ｗｅｒｅ ｌａｂｅｌｅｄ ｂｙ ｒａｔ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＲ１ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｎａｔｉｂｏｄｙａｎｄＦＩＴＣ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄｇｏａｔ ａｎｔｉ—ｍｏｕｓｅａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｆｌｏｗ ｃ￣ｏｍｅｔｒｙｗａｓｕｓｅｄｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｎｕｍｂｅｒ ｏｆＣＲ１，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅＤＴＥＲａｎｄ ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｍｃｒｅａｓｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｂｙ ０．１７ ｍｍｏｌ／Ｌ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｈｏｌｅｓｔｒｅｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｙｂ ０．０６ ｍｍｏｌ／Ｌ．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ Ｂａｎｄ ３，ｇｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎ Ａ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｎａｄ ｓｉｌａｉｃ ａｃｉｄ ｗｅｅｒ ｎｉｃｒｅａｓｅｄｂｙ ２．８８％，７．４０％ａｎｄ０．２３ｍｍｏｌ／Ｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｍｅｍｂｒａｎｅｆｌｕｉｄｉｔｙｗａｓａｌｓｏｉｍｐｒｏｖｅｄｒｅｍａｒｋａｂｌｙ．ＴｈｅｕｓｅｏｆＡｓｐａｒａｇｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｌｓｏ ｒｅｓｕｌｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅ￣ｅ ｏｆ ＣＲ１ ｎｕｍｂｅｒ，ＤＴＥＲ ａｎｄ ＲＢＣ—Ｃ３ｂＲＲ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｍｏｄｅｌ ｍｉｃｅ ｂｙ ５．９％，３．１３％ａｎｄ ３．２６％， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｓｅ ｒｅ ｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃａｎ ａｄｊｕｓｔ ｔｈｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ ｏｆｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｍｏｄｅｌ ｍｉｃｅ．ｉｍｐｒｏｖｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ａｎｄ ｒｅｓｔｏｒｅｍｅｍｂｒａｎｅｆｌｉｕｄｉｔｙ ａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ａｓｐａｒａｇｕｓｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃａｎ ａｌｓｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｉｎｌｍｕｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎｂｙａｆｆｅｃｔｉｎｇＣＲ１． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｓｔｒａｇａｌｓｕ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｔｕｍｏｒ；ｍｉｃｅ；ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ；ｉｍｌＴｌｕｔｌｅｆｕｎｃｔｉｏｎ 黄芪，又名黄耆，为豆科草本植物蒙古黄芪、膜 由黄芪根部提取，是黄芪的主要活性成分之一，由己 荚黄芪的根，具有补气固表、利水退肿、托毒排脓、 糖醛酸、葡萄糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖 生肌等功效。黄芪多糖（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＡＰＳ） 醛酸和葡萄糖醛酸等组成，可作为免疫促进剂或调节 收稿日期：２０１３－－０５－２０ 剂，同时：具有抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、’抗辐射、抗 基金项目：黑龙江省青年科学基金项目（０Ｃ２０１１Ｃ１００）；国家自然科学基金 应激、抗氧化等作用【ｌ吲。大量研究表明黄芪多糖不仅 资助项目（３０６７２５９５） 能增强网：伏内皮系统的吞噬功能，使白细胞、巨噬细 作者简介：季宇彬（１９５６－），男，博士，教授，多糖抗肿瘤活性研究 胞吞噬指数显著升高，激活巨噬细胞、自然杀伤细胞 ２０４２ 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．９ （ＮＫ）等免疫细胞，还能活化Ｔ淋巴细胞亚群，促 进细胞因子生成，在多条途径、多个层面对免疫系统 发挥作用 。 。 １９８１年Ｓｉｅｇｅｌ提出红细胞免疫系统，并推测红细 胞可阻止癌细胞在血循环中播散。此后，红细胞免疫 与肿瘤发生的研究不断受到重视，红细胞作为一种免 疫细胞，在肿瘤发生发展中的主要作用有：免疫黏附 作用、促吞噬作用、效应细胞样作用、对淋巴细胞和 细胞因子的等【５Ｊ。现代研究表明，肿瘤机体红细 胞免疫功能表现为继发性缺陷，肿瘤细胞的繁殖可产 生对抗红细胞机体免疫功能的物质，使红细胞免疫功 能低下，粘附肿瘤细胞的能力降低。中医药对红细胞 免疫功能的影响是当前红细胞免疫研究的一个新领 域，现已发现许多中药多糖对红细胞免疫功能有促进 和调节作用，从而发挥抗肿瘤作用。 目前关于黄芪多糖对肿瘤机体细胞免疫功能影响 的研究报道较少，相关机制并不明确。本研究考察了 黄芪多糖对肿瘤模型小鼠红细胞膜组分、结构和免疫 功能的影响，可以为黄芪多糖在抗肿瘤及增强免疫方 面更深入广泛的研究及应用提供参考。 １材料与方法 １．１ 实验动物及肿瘤细胞株 昆明种小鼠，体重（２０￣２．０）ｇ，雌雄各半，由 黑龙江中医药大学动物室提供，动物质量合格证号： 黑动字第００１０１００３号。肉瘤细胞Ｓ１８０，哈尔滨商业大 学药物研究所提供。 １．２药物与试剂 黄芪多糖（含量６７．５％，哈尔滨商业大学生命科学 与环境科学研究中心提供）；蛋白定量试剂盒、磷脂测 定试剂盒、胆固醇测定试剂盒、唾液酸测定试剂盒， 购自南京建成生物工程研究所；ＤＰＨ荧光染料，购自 Ｓｉｇｍａ公司；大鼠抗小鼠ＣＤ３５单抗，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ 公司）；ＦＩＴＣ标记羊抗大鼠二抗，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司；补 体致敏酵母多糖冻干试剂，Ｓｉｇｍａ公司；ＦＩＴＣ标记大 鼠抗小鼠ＣＤ２５，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ公司；小鼠淋巴细胞 分离液；丙烯酰胺，甲叉双丙烯酰胺，三羧甲基氨基 甲烷，甘氨酸，十二烷基硫酸钠，甘油，Ｂ一巯基乙醇， 溴酚蓝，过硫酸铵，四甲基乙二胺，考马斯亮蓝Ｒ－２５０， 甲醇，冰醋酸，高碘酸，Ｓｃｈｉｆｆ试剂。 ｌ＿３主要仪器设备 ＬＤ４—２Ａ型离心机，北京医用离心机厂；Ａｌｌｅｇｒａ ２０４３ ６４Ｒ低温高速离心机，美国Ｂｅｃｋｍａｎ．Ｃｏｕｌｔｅｒ公司； 电泳仪，美国Ｂｉｏ．Ｒａｄ公司；凝胶成像系统，美国 Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司；ＤＫＺ系列恒温水浴箱，上海一恒科技 有限公司；７５２紫外一可见分光光度计一卜海第三仪器 厂；ＲＦ一５３０１ＰＣ荧光分光光度计，同本ＳＨＩＭＡＤＺＵ； ＥＰＩＣＳ—ＸＬ流式细胞仪，美国Ｂｅｃｋｍａｎ—Ｃｏｕｌｔｅｒ公司。 ｌ－４实验方法 １．４．１肿瘤模型小鼠造模 无菌条件下抽取接种第７ ｄ的生长良好的Ｓ 小 鼠腹水（活癌细胞数＞９７％），无菌生理盐水稀释，调整 细胞浓度约２ｘ１０ ＋／ｍＹ，无菌操作小鼠右前肢腋部皮 下接种，０．２ ｍＬ／只。 １．４．２实验分组、给药 小鼠随机分成３组，每组ｌ０只，分别为正常组、 肿瘤模型组、黄芪多糖组。正常组、肿瘤模型组给 生理盐水０．２ ｍＬ／只／ｄ，黄芪多糖５０ ｍｇ／（ｋｇ・ｄ１。小鼠 于接种２４ ｈ后开始腹腔注射给药，１次／ｄ，连续给药 ７ ｄ。 １．４－３红细胞膜的制备 停药２４ ｈ后眼球采血，肝素抗凝。新鲜血液２０００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ，加ＰＢＳ ２０００ ｒ／ａｒｉｎ离心５ ａｒｉｎ，洗涤 ３次。红细胞悬液加入５ ｍＬ １０ ｍｍｏｌ／ＬｐＨ ７．４ Ｔｒｉｓ—ＨＣＩ 溶液，４℃溶血１２ ｈ，将所得红细胞溶血液以１２０００￣ｇ， ４℃离心１５ ｍｉｎ，弃上清液，１０ ｍｍｏｌ／Ｌ ｐＨ ７．４ Ｔｒｉｓ—ＨＣ１ 溶液洗涤３次，同上离心，吸取白色沉淀物，最后１：１ 悬浮在ｐＨ ７．４ ＰＢＳ缓冲液中。蛋白定量试剂盒测定蛋 白含量，检测波长５９５ Ｉｌｍ。 １．４．４红细胞膜脂质提取 准确量取０．８ ｍＬ膜溶液，加３ ｍＬ氯仿：甲醇（１： ２，Ｖ／Ｖ）剧烈震荡２ ｍｉｎ。３０００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ，在 离心管里分相，用细滴管穿过两相界面处变性蛋白的 薄层，吸出下相液，转移到一个小烧杯内，置真空干 燥器内蒸发至干。 １．４．５红细胞膜磷脂、胆固醇含量测定 采用试剂盒分别测定磷脂和胆固醇含量。检测波 长６４０ ｎｌ＇ｒｌ，计算磷脂含量；检测波长５００ ｎ／Ｉ１，计算 胆固醇含量。 １．４．６红细胞膜带３蛋白、血型糖蛋白Ａ相对 含量测定 缓冲液按１：ｌ比例与蛋白质样品混匀，１００℃保 温３－５ ｍｉｎ，冷却至室温，用微量进样器分别吸取膜 样品２０ ｕＬ。调节电流至２０ ｍＡ，以恒电流方式电泳。 将凝胶浸入考马斯亮蓝染色０．５ ｈ，弃去染色液。加入 脱色液脱色至背景透明清楚为止。将凝胶置于凝胶成 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｃｌｌｏｇｙ ２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．９ 像系统中拍照，进行Ｂａｎｄ ３含量分析。另将凝胶浸入 Ｓｃｈｉｆ试剂染色１ ｈ，弃去染色液。加入脱色液脱色至 背景透明清楚为止。将凝胶置于凝胶成像系统中拍照， 进行ＧＰＡ含量分析。 （Ｐ＜０．０５），并且磷脂所占的比例增加，改善了肿瘤模 型小鼠红细胞膜脂质成分的含量。 表１黄芪多糖对小鼠红细胞膜磷脂、胆固醇含量的影晌 （ｎ＝１０， ） １．４．７红细胞膜唾液酸含量测定 采用试剂盒测定，检测波长５６０ ｎｎｌ处，计算唾液 Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆＡｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆＰＬ ａｎｄ Ｃｈ ｏｎ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ 酸含量。 １．４．８红细胞膜流动性测定 １．４．８．１红细胞膜荧光标记 取新配制的２ ｍｍｏｌ／Ｌ ＤＰＨ标记液四氢呋喃液ｌ０ 分别加入１０．０ ｍＬ红细胞膜缓冲液中，２５℃水浴 ３０ｍｉｎ，用ＰＢＳ液洗涤１次，最后将细胞悬浮于４．０ｍＬ ＰＢＳ液中，即得ＤＰＨ标记的细胞膜。 １．４．８．２荧光偏振度的测定 细胞膜的流动性采用荧光偏振度（Ｐ）和微黏度 （１１）来表示。用ＲＦ５４０荧光分光光度计采用氙灯光源， 荧光激发波长为３６２ ｎｌＴＩ，发射波长为４３２ ｎｌＴｌ。在２５℃ 下分别测定与激发偏振光振动方向平行、垂直时的荧 光偏振光强度Ｐ，计算红细胞膜膜脂流动性ＬＦＵ＝ （０．５－Ｐ）／ｐ ；￣＝２Ｐ／（０．４６．Ｐ）。 １．４．９红细胞ＣＲ１数量测定 测定 数量洲 参煮 彬 ＣＲ１ 。 建立的实验方法，采用流式细胞仪 ２１．４．１０红细胞ＣＲ１活性测定 依照郭峰【５Ｊ建立的ＲＢＣ—Ｃ３ｂＲＲ和ＤＴＥＲ实验， 测定ＲＢＣ—Ｃ３ｂＲＲ和ＤＴＥＲ。 １．５统计方法 运用ＳＰＳＳ １５．０ ｆｏｒ ｗｉｎｄｏｗｓ进行数据统计分析， 数值采用 ±Ｓ表示，组间比较采用ＡＮＯＶＡ分析， 以Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１为差异有统计学意义。 ２结果与讨论 ２．１ 黄芪多糖对小鼠红细胞膜磷脂、胆固醇含 量的影响 黄芪多糖对肿瘤模型小鼠红细胞膜磷脂、胆固醇 含量影响的结果如表１所示。表１表明，与正常小鼠 比较，肿瘤模型小鼠红细胞膜脂质含量异常，磷脂含 量减少、胆固醇含量增加，两组之间比较具有非常显 著性差异（Ｐ＜０．０１），并且磷脂与胆固醇的比例减小， 这说明肿瘤模型小鼠红细胞膜结构的稳定性降低。黄 芪多糖给药后可以升高肿瘤模型小鼠红细胞膜磷脂含 量、降低胆固醇含量，与模型组比较具有显著性差异 组别 剂量 磷脂 胆固醇 磷脂 ／（ｍｇ／ｋｇ）／（ｅｒｔｏｏｌ／Ｌ）／（ｍｍｏｌ／Ｌ）／胆固醇 注：与模型对照组比较： Ｐ＜０．０５，料Ｐ＜０．０１水平差异有 统计学意义。 磷脂和胆固醇是细胞膜脂质双层最主要的两种膜 脂质成分，它们在细胞膜中含量的变化可直接影响细 胞膜的功能【７Ｊ。并且脂质中磷脂所占的比例较大，其 与胆固醇的比例是决定细胞膜流动性的主要因素，对 于维持脂质双分子层结构稳定起到一个至关重要的作 用。黄芪多糖可以通过升高肿瘤机体红细胞膜磷脂含 量、降低胆固醇含量，从而有助于维持细胞膜结构的 稳定性，改善肿瘤机体红细胞的生理功能。 …－２ 黄芪多糖对小鼠红细胞膜带３蛋白、血型 肥肽ｒ１ 皿 、 土 糖蛋白Ａ、唾液酸含量的影响 黄芪多糖对肿瘤模型小鼠红细胞膜带３蛋白、血 型糖蛋白Ａ含量影响的结果如表２所示。表２表明， 与正常小鼠比较，肿瘤模型小鼠红细胞膜带３蛋白、 血型糖蛋白Ａ的含量明显降低，两组之间比较具有 显著性差异（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），这说明肿瘤模型小鼠 红细胞膜结构的稳定性降低。黄芪多糖给药后可以升 高肿瘤模型小鼠红细胞膜两种蛋白的相对含量，与模 型组比较具有显著性差异（Ｐ＜０．０５），调整并改善了肿 瘤模型小鼠红细胞膜脂质双层中膜蛋白成分的含量。 表２黄芪多糖对小鼠红细胞膜带３蛋白、血型糖蛋白Ａ、唾液 酸含量的影响（ｎ＝１０， ） Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｎ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｂａｎｄ ３，ＧＰＡ ａｎｄ ＳＡ ｏｎ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ 组别 剂量 带３蛋白 血型糖蛋 唾液酸 ／（ｍｇ／ｋｇ）／％ 白Ａ／％ ／（ｅｒｔｏｏｌ／Ｌ） 注：与模型对照组比较： Ｐ＜０．０５，料Ｐ＜０．０１水平差异有统 计学意义。 ２０４４ 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．９ 黄芪多糖对肿瘤模型小鼠红细胞膜唾液酸含量影 响的结果如表２所示。表２表明，与正常小鼠比较， 肿瘤模型小鼠红细胞膜唾液酸含量明显降低，两组之 间比较具有非常显著性差异（Ｐ＜０．Ｏ １）。黄芪多糖给药 后可以增加肿瘤模型小鼠红细胞膜唾液酸含量，与模 型组比较具有非常显著性差异ｆＰ＜０．０１），调整并改善 了肿瘤模型小鼠红细胞膜脂质双层中膜糖成分的含 量。 带３蛋白是红细胞膜上含量最丰富的蛋白质，约 占膜蛋白含量的２５～３０％，也是红细胞膜上重要的结 构蛋白和功能蛋白【８Ｊ。血型糖蛋白Ａ是红细胞膜上含 量最丰富的涎糖蛋白，参与红细胞膜结构的调节，间 接影响红细胞形态、柔性和稳定性 。病理状态下， 这两种膜蛋白的含量和结构会发生变化，从而对红细 胞的生理功能和免疫效应产生影响。唾液酸是红细胞 膜上重要的膜糖成分，其含量对于红细胞功能的正常 发挥有重要作用。唾液酸减少可以引起糖脂、糖蛋白 结构和功能异常，促进红细胞老化，使红细胞凝集性 和脆性增加，从而影响红细胞的生理功能。黄芪多糖 可以通过增加肿瘤机体红细胞膜蛋白的相对含量和膜 糖成分的含量，调整肿瘤机体红细胞脂质双分子层的 形态结构，从而改善红细胞的生理功能。 ２＿３黄芪多糖对小鼠红细胞膜流动性的影响 黄芪多糖对肿瘤模型小鼠红细胞膜流动性影响的 结果如表３所示。表３表明，与正常小鼠比较，肿瘤 模型小鼠红细胞膜微黏度增加，膜流动性明显降低， 两组之问比较都具有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１），这说 明肿瘤模型小鼠红细胞膜结构的稳定性降低。黄芪多 糖给药后可以降低肿瘤模型小鼠红细胞膜荧光偏振度 和微黏度，提高肿瘤小鼠红细胞膜流动性，与模型组 比较具有显著性差异（Ｐ＜０．０５），这进一步证明黄芪多 糖有助于恢复肿瘤模型小鼠红细胞膜结构的稳定性。 表３黄芪多糖对小鼠红细胞膜流动性的影响（ｎ＝１ ０，２－：：ｋｓ） Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆＡｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｎ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｍｅｍｂｒａｎｅｆｌｕｉｄｉｔｙ 组别 剂量 微黏度 膜流动性 ／（ｍｇ／ｋｇ）振度 注：与模型对照组比较： Ｐ＜０．０５， Ｐ＜０．０１水平差异有 统计学意义。 细胞膜流动性是生物膜结构的一个基本特性，适 宜的膜脂流动性是维持细胞膜正常功能的必要条件 ｕ ｏＪ。当机体处于病理状态时，细胞膜的结构和功能发 生变化，膜脂质流动性的变化是其直观的体现。实验 在考察黄芪多糖对肿瘤模型小鼠红细胞膜脂质、膜蛋 白和膜糖含量影响的基础上，进一步考察了对红细胞 膜流动性的影响。实验证明，肿瘤黄芪多糖由于调整 肿瘤机体红细胞膜主要成分的含量和结构，提高了细 胞膜脂质流动性，恢复细胞膜结构的稳定性，从而有 助于改善红细胞生理功能。 ２－４黄芪多糖对小鼠红细胞ＣＲ１数量和活性 的影响 黄芪多糖对肿瘤模型小鼠红细胞ＣＲ１数量影响 的结果如表４所示。表４表明，肿瘤模型小鼠红细胞 免疫分子ＣＲ１数量显著低于正常小鼠，两组之间比较 具有非常显著性差异（Ｐ＜０．０ １）。黄芪多糖给药后可以 增加肿瘤模型小鼠红细胞ＣＲ１数量，与模型组比较具 有显著性差异（Ｐ＜０．０５），有助于恢复肿瘤模型小鼠红 细胞的免疫功能。结果见图ｌ。 表４黄芪多糖对小鼠红细胞ＯＲ１数量的影响（ｎ＝１０，Ｙ：ｋｓ） Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆＡｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｅｅｈａｒｉｄｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １ 注：与模型对照组比较： Ｐ＜０．０５，｝ Ｐ＜０．０１水平差异有统 计学意义。 ‰ 图１红细胞ＣＲ１表达 ＦｉｌｌＨｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｆＣＲ１ 泣Ａ＿正常纽Ｂ 组；Ｃ一模型＋黄芪多糖组。 黄芪多糖对肿瘤模型小鼠红细胞ＣＲ１活性影响 的结果如表５所示。表５表明，肿瘤模型小鼠的肿痛 红细胞花环率（ＤＴＥＲ）和红细胞Ｃ３ｂ受体花环率 （ＲＢＣ．Ｃ３ｂＲＲ）显著低于正常小鼠，两组之间比较具 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．９ （上接第２０４６页） ［６］ 季宇彬，闵永萃，汲晨锋．芦笋多糖对Ｓ１８０小鼠红细胞补体 受体．１（ＣＲ１，ＣＤ３５）数量及活性的影响［Ｊ１．中国药学杂 志２００９．４４（１４）：１０６６－１０６９ Ｊｉ Ｙ Ｂ，Ｍｉｎ Ｙ Ｃ，Ｊｉ Ｃ Ｆ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆａｓｐａｒａｇｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｂｌｏｃ￣Ｃｅｌｌｓ Ｍｏｌ Ｄｉｓ，２００８，４１（１）：３５－４３ Ｈ Ｈ，Ｍａｒｉｎａ Ｃ Ｒ Ａｂｅｌ Ｌ Ｒ ｅｔ ａ１．Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ［１Ｏ】 Ａｎｇｅｌｅｒｙａ￣ｃｙｔｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｐｏｓｉｉｔｏｎ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ＣａｎＣｅｒ［Ｊ］．Ｂｌｏｄ Ｃｅｌｌｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，２００６，３６（３）：３５５－３６３ Ｌｉｕ Ｄ，Ｎｉｕ Ｚ Ｘ．Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｇｅｎｅｔｉｃ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ， ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １（ＣＤ３５）ｏｆ Ｓ１８０ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００９，４４（１４）：１０６６・１０６９ ［７】 汲晨锋，肖风．青龙衣多糖对Ｓ１８０小鼠红细胞膜组分的影 响【Ｊ］．哈尔滨商业大学学报（自然科学版），２００８，２４（４）：３９１— ３９５ ｔｙｐｅ １（ＣＲ１／ＣＤ３５）［Ｊ】．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ， ２００９，３ １（４）：５２４—５３５ ｎ Ｓ Ｓ，ＡｌｄｈａｍｅｎＹＡ，ＡｐｐｌｄｏｍＤＭ，ｅｔｅ ａ１．ＣＲ１／２ｉｓ ［１２】 Ｓｅｒｅｇｉｎ ｉａｍｐｏｒｔａｎｔ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ Ａｄｅｎｏｖｉｒｎｓ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎｎａｔｅ Ｊｉ Ｃ Ｅ Ｘｉａｏ Ｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｑｉｎｇｌｏｎｇｙｉ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｎ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ａｎｄｆｌｕｉｄｉｙｏｆＳ１ｔ８０ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ Ｈａｒｂｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｙｔ ｏｆ Ｃｏｍｍｅｒｃｅ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｎｃｅｅｓ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｎｄ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅ ｈｅＴｒ，２００９，１６（１０）：１２４５－ １４５９ Ｅｄｉｉｔｏｎ），２００８，２４（４）：３９１－３９５ ［８】Ｂｒａｄ Ｓ Ｊａｍｅｓ Ｄ Ｈ，Ｊａｍｅｓ Ｒ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ Ｂａｎｄ ３ ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ ｓｔａｔｅ ｐｒｅｃｅｄｅ ｃｅｌｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｌｏｓｓ 徐嘉静，何建梅．黄芪多糖对三黄鸡红细胞免疫功 ［１３］ 赵翠燕，能的影响［Ｊ】．广东农业科学，２０１２，２３，１０４．１０６ Ｚｈａｏ Ｃ Ｘｕ Ｊ Ｊ，Ｈｅ Ｊ Ｍ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｄｕｒｉｎｇｂｌｏｏｄｂａｎｋ ｓｔｏｒａｇｅ ｏｆｒｅｄｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ， ２００９，４９（７）：１４３５－１４４２ ［９］ Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ Ｒ Ｃ，Ｔｏｙｅ Ａ Ｍ．ＧｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎＡ：Ｂａｎｄ ３ ａｉｄ【Ｊ］． ｐｏｌｙｓａｅｅｈａｒｉｄｅｓ（ＡＰＳ）ｏｎｉｍｍｕｎｉｙｏｆｅｔｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｉｎｂｒｏｉｌｅｒｓ ［Ｊ］．ＧｕａｎｇｄｏｎｇＡｇｒｉｃｌｔｕｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１２，２３，１０４－１０６ ２０５２
