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《沈阳医药》 ・￣ｇ２ Ｗｌ 。ｏ ７９Ｏ・ 年３月蜂胶总黄酮抗心肌缺血再灌注损伤的生化机制的研究 郝君‘ 张摘要波 王东风‘ 为探讨蜂胶总黄酮抗心肌缺血再灌注损伤的生化机制，采用离体心脏缺血再灌注模型，观察蜂胶 总黄酮对心脏缺血再灌注的保护作用。结果表明，治疗组的ＳＯＤ比模型组明显提高（Ｐ＜０．０５），ＭＡＤ明显降 低（Ｐ＜０．０５）。治疗组的去甲肾上腺素和肾上腺素比模型组显著提高（Ｐ＜０．０１）。结论：蜂胶总黄酮对心肌缺 血再灌注损伤有保护作用。 关键词蜂胶总黄酮缺血再灌注损伤 蜂胶是植物遗传精华物质与蜜蜂分泌物的复 合化合物，是由蜜蜂采集植物幼芽中的树脂并混 入其上腭分泌物及蜂蜡等加工而成的天然物质。 蜂胶提取物中可以分离鉴定多种黄酮。蜂胶总黄 酮（ｔｏｔａｌ ｆａｖｏｎｅｓ ｏｆ ｐｒｏｐｏｌｉｓ，ＴＦＰ），具有广泛的生 理活性。本文探讨ＴＦＰ抗实验性心肌缺血再灌 注损伤的机制。 １材料与方法 １．１材料 １．１．１实验动物Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠，体 重２００—２５０ ｇ，雌雄兼用，由锦州医学院实验动物 中心提供。 １．１．２药物与试剂ＴＦＰ由中国协和医科大学药 用植物研究所提供，均为棕色粉末，易溶于水，实 验时用生理盐水配成所需浓度，离体灌流时用灌 流液配制。ＳＯＤ活性测定试剂盒和ＭＤＡ测定试 剂盒购白军事医学科学院放射医学研究所。垂体 后叶素购自南京生物化学制药厂（批号： ０３０７０２）。去甲肾上腺素和肾上腺素为Ｓｉｇｍａ产 品。 １．２方法分组ＳＤ大鼠，体重２００—２５０ ｇ，随机 分成３组，即正常灌流组、缺血再灌组和ＴＦＰ （１００ ｍｇ／Ｌ）组，每组６只。 １．２．１心肌标本制作… 大鼠击头致昏，仰卧开 胸，打开心包，剪开肺动脉根部，分别从主动脉和 左心房插入导管与灌流液相联，移入３７℃恒温装 置。先逆灌平衡１５ ｍｉｎ（灌注７ ｍｌ／ｍｉｎ，用蠕动泵 控制流速），随后改为工作心脏，前后负荷分别为 ９ ｍｍＨｇ和５２ ｍｍＨｇ，稳定ｌ５—２０ ｍｉｎ开始实验。 灌流液条件（ｍｍｏｌ／Ｌ）：ＮａＣ１ １１７．２１，ＫＣ１ ５．１７， ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．８，ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２０ ０．９２，ＣａＣＩ２ ２２．４７，ＮａＨＣＯ ２．５，ＥＤＴＡ ０．０５，葡萄糖１．１ １，并 第２０５医院药剂科１２１００１ 充给９５％Ｏ２和５％ＣＯ２的混合气体，温度（３７．０ ±０．５）℃，ｐＨ ７．４（灌流液以双蒸水配制）。待稳 定后，向灌流液中加入相应浓度药物。５ ｍｉｎ后结 扎两组的冠状动脉左降支，１０ ｍｉｎ后去除结扎，再 灌１０ ｍｉｎ后，取下心脏，切去右室和心房，将左室 投入液氮内保存。 １．２．２丙二醛（ＭＡＤ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ） 测定方法 － 将液氮内冷冻的心肌取出称重后， 用生理盐水制成１０％匀浆，１６ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心 １５ ｍｉｎ，上清液一部分用化学发光法测定ＳＯＤ含 量，另一部分用比色法测ＭＡＤ含量。 １．２．３去甲肾上腺素（ＮＥ）、肾上腺素（ＥＰ）测定 方法 将液氮内冷冻的心肌取出在电子天平 上称重，用０．４ ｍｏｌ／Ｌ的ＨＣＩＯ 制成１０％匀浆，于 ４℃，１５ ０００ ｒ／ｍｉｎ离 Ｇ，１５ ｍｉｎ，上清液中加入１／３ 体积高钾液，４℃静置１０ ｍｉｎ，同样条件再离心 １５ ｍｉｎ，取上清液置一３０℃低温冰箱保存待测。 测定时将样品融化，取２０ 进样，用高效液相色 谱仪分离，电化学检测器检测，电脑积分仪描制面 积曲线并计算ＮＥ及ＥＰ含量。 １．３统计学处理计量资料采用（ｘ±ｓ）表示，采 用Ｆｉｓｈｅｒ精确检验程序进行统计学处理。 ２ 结果 ２．１对ＳＯＤ及ＭＤＡ的影响 从表１可知，缺血 再灌注大鼠ＭＤＡ含量升高，ＳＯＤ含量下降，与正 常组比较差异有高度显著性（Ｐ＜０．０１）。ＴＦＰ均 具有对抗缺血再灌注损伤时ＭＤＡ升高和ＳＯＤ下 降的作用，与缺血再灌注组比较差异有显著性（Ｐ ＜０．０５）。 ２．２对ＮＥ及ＥＰ的影响采用ＨＰＬＣ—ＥＣ方法 测定再灌注后心肌内ＮＥ、ＥＰ含量的变化。心肌 内此类递质含量越低，表明再灌诱发ＮＥ释放越 多。表２结果表明，缺血再灌组ＮＥ含量明显低 于正常组（Ｐ＜０．０１），ＴＦＰ组ＮＥ的含量也明显低 维普资讯 http://www.cqvip.com
《沈阳医药》 表１ 膂 ・ ｌ・ ３组ＭＤＡ和ＳＯＤ含量比较（互±ｓ，／７，＝６） 作用 －６］。ＭＤＡ作为脂质过氧化的代谢终产物， 其含量的增大常被用来评价心肌受自由基损伤的 严重程度。ＳＯＤ是体内自由基的主要清除酶，其 活性升高表明机体自由基清除加快。通常，心肌 缺血再灌注损伤时，ＭＤＡ含量升高，ＳＯＤ活性下 与正常组比较・・Ｐ＜ｎＯｌ：与缺血再灌注比较Ａ Ｐ＜ｎ０５ 降 。本实验结果表明，在给予ＴＦＰ后，ＭＤＡ含 量明显下降，ＳＯＤ活性显著升高。由此可以认为 于正常组（Ｐ＜０．０１），两者的ＮＥ含量无明显差 别，表明二者对心肌缺血再灌注损伤中ＮＥ释放 的增多无明显影响。ＥＰ含量在３组间差异均无 显著性（Ｐ＞０．０５），表明该递质含量在心肌缺血 再灌注损伤中未发生明显变化。 表２ ３组去甲肾上腺素和ＥＰ的含量 比较（互±ｓ，／７，＝６） ＴＦＰ使ＭＤＡ含量下降与其清除氧自由基，从而抑 制自由基产生脂质过氧化作用有关，这可能是它 们抗再灌注损伤的生化机制之一。 近年来有学者认为再灌注诱发的室颤主要是 儿茶酚胺大量释放的结果。本组结果也表明再灌 注１０ ｍｉｎ时确有ＮＥ大量释放，以致心肌ＮＥ含量 减少，但对ＥＰ无任何影响。未观察到ＴＦＰ对心 肌ＮＥ含量的影响，表明它们可能并不是通过影 响ＮＥ释放来实现它们对缺血再灌注心肌的保护 作用的。 参考文献 １ Ｆｌｙｎｎ ＳＢ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｗｏｒｋｉｎｇ ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ ｈｅａｒｔ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ ａｎｄ ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎｅ．Ｊ ３讨论 Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｍｅｔｈ，１９７８；１：１８３ ２李益新．血液和组织中超氧化物歧化酶的微量测定．军 缺血一定时间、一定程度会引起组织细胞的 事医学科学院院刊，１９８４；３１：３５９ 损伤。使缺血的器官或组织重新得到血液供应和 血流的重灌注是防止损伤，使组织细胞存活下来 的必要措施。但近年发现有些情况下，经过一定 时间缺血的组织器官并未发生明显的功能结构障 ３郑金生，王立群．沙棘总黄酮与银杏总黄酮抗心肌缺血 再灌注损伤的生化机制研究．中国煤炭医学杂志，２００３； ６：１０２４ ４翁玉椿．细胞和细胞膜内过氧化脂质的微量定量．细胞 物理学杂志，１９８５；７：１４２ 碍，在得到血液再灌注时却出现了明显的障碍，甚 至发生了不可逆的损伤性变化；有时细胞已发生 ５姚睦．再灌注与自由基，再灌注损伤机制的探讨．国外 医学・心血管疾病分册，１９８７；１４：１００ 了严重的缺血性损伤，但再灌注并不使损伤减轻， 反而加重了细胞的死亡。人们开始意识到，再灌 ６常英姿．心肌缺血再灌注损伤的发病因素．基础医学与 临床，１９９３；１３：１６ ７ Ｒａｏ ＰＳ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌｓ ａｎｄ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄｅｓ ｉｎ 注在一定条件下反而加重了损伤，形成了缺血一 再灌注损伤这一概念。目前认为有关再灌注心肌 损伤与下述三方面的因素有关，即细胞内Ｃａｎ超 载、氧自由基的大量产生、微血管损伤和白细胞的 ・ｅａｒｌｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｊ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ， １９８３；１５：７１３ （收稿：２０ｏ６一ｌｌ—ｌ８修回：２０ｏ６一ｌ２—ｏ４） 小资料・ 脑红蛋 白 脑红蛋白（ｎｅｕｒｏｇｌｏｂｉｎ，ＮＧＢ）是新近发现的神经系统中特异的携氧球蛋白，与脑内氧供应密切相关。ＮＧＢ主要以单 体形式存在，由含有１５１个氨基酸的单链组成，分子量为１７ ｋＤ。ＮＧＢ ｍＲＮＡ阳性细胞广泛分布于脑皮质，尤以颞叶听 区、扣带皮质、梨状皮质较为密集。阳性细胞主要是锥体细胞。ＮＧＢ对氧有很高的亲和力，能够可逆地结合氧，其能力高 于血红蛋白的携氧能力。此特点使其十分有利于转运氧通过血脑屏障，提高耗氧高的脑组织的氧利用率。ＮＧＢ在组织 中表达水平的高低与组织的缺氧耐受性呈正相关，其含量越低，组织对缺氧的耐受性越差，提示ＮＧＢ在脑缺氧的适应性 保护过程中起重要作用。但目前尚不清楚究竟通过何种方式发挥其神经元保护作用。 ［摘自《中国医疗）２ｏｏ６；５（６）：４６］
