第４１卷第１期 ２０１０年１月 尔北农业大学学报 ４１ｆｌ１：１０３￣１０６ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ａ ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｊａｎ．２０１０ 鹿茸粉对小鼠酒精急性肝损伤的保护作用 夏彦玲，李婷婷，李楠楠，马志朋，杨仕隆，李和平 （东北林业大学野生动物资源学院，哈尔滨，１５００４０） 摘要：利用酒精复制小鼠急性肝损伤模型，测定小鼠血清中谷丙转氨酶（ＡＬＴ）、谷草转氨酶（ＡＳＴ）活性， 观察肝组织病理学形态及肝细胞的超微结构。结果表明，鹿茸粉大剂量组可显著降低血清中Ａ 、ＡＳＴ的水平 （Ｐ＜０．０１），小剂量组差异不显著（尸＞０．０５），中、高剂量组发生肝细胞坏死的动物例数减少，病变程度减轻，电镜 检测结果表明，鹿茸粉能改善染色质边集、内质网扩张、线粒体肿胀、细胞质膜受损等病理改变，可见鹿茸粉对 小鼠酒精急性肝损伤有明显的保护作用。 关键词：鹿茸粉；酒精；肝损伤 中图分类号：Ｒ２８５．５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００５—９３６９（２０１０）０１—０１０３—０４ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ ｏｎ ａｃｕｔｅ ｈｅｐａｔｉｃ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａｌｃｏｈｏｌ ｉｎ ｍｉｃｅ／ｘＩＡ Ｙａｎｌｉｎｇ，ＬＩ Ｔｉｎｇｔｉｎｇ，ＬＩ Ｎａｎｎａｎ，ＭＡ Ｚｈｉｐｅｎｇ，ＹＡＮＧ Ｓｈｉｌｏｎｇ，ＬＩ Ｈｅｐｉｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｗｉｌｄｌｉｆｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ，Ｎｏ￣ｈｅａｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ １ ５００４０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｈｅｐａｔｉｃ ｉｎｊｕｒｙ ｗａｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａｌｃｏｈｏｌ ｉｎ ｍｉｃｅ．ＡＬＴ ａｎｄ ＡＳＴ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｃｅｌｌ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｃｏｈｏｌ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＡＬＴ ａｎｄ ＡＳＴ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎ ｈｉｇｈ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ（Ｐ＜０．０１）ａｎｄ ｉｎ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ （Ｐ＞０．０５），ｔｈｅ ａｎｉｍａｌ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｈａｐｐｅｎｉｎｇ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｗａｓ ｌｏｗｅｒｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｗａｓ ｌｉｇｈｔｅｎｅｄ．Ｕｌｔｒａｔｈｉｎ ｓｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ ｃｏｕｌｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ，ｔｈｅ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ，ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉ— ｃｕｌｕｍ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｔｈｅ ｄａｍａｇｅ ｏｆ ｃｅｌｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｉｔ ｃａｎ ｂｅ ｓｅｅｎ ｔｈａｔ ａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ ｈａｓ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａｌｃｏｈｏｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｉｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ；ａｌｃｏｈｏｌ；ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ 酒精性肝病（Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＬＤ）是发 达国家最常见的肝脏疾病，近年来我国由于饮酒导 统的中药，鹿茸具有活性成分多，靶位点多等优 势，所以本研究以５６。白酒造模，以鹿茸粉为治疗 致酒精肝的发生率也呈明显的上升趋势，因此酒精 性肝病的防治已成为医学上的一个重要课题。鹿茸 是雄性鹿科动物生长的一种尚未骨化的幼角，据记 载，我国是最早将鹿茸作为药用的国家，距今已有 剂研究鹿茸粉对酒精急性肝损伤的保护作用。 １ 材料与方法 １．１药物与试剂 两千年的历史，鹿茸作为我国传统的名贵中药，其 药性甘、咸、温、入肝、肾经，能增强免疫力．抗 鹿茸粉：自制。取鹿茸，燎去茸毛，刮净，劈 成碎块，干燥并用万能粉碎机粉碎，过１００目筛后 即得（鹿茸由国家林业局野生动植物检测中心提供 疾病抗衰老，是全身的滋补强壮剂ｌｌｌ。作为一种传 收稿日期：２００９—０８—２８ 基金项目：东北林业大学本科生创新项目（２００８００１） 作者简介：夏彦玲（１９７４一），女，博士研究生，研究方向为动物遗传育种与繁殖。 通讯作者：李和平，教授，博士生导师，研究方向为动物遗传育种与繁殖。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｈｅｐｉｎｇｈｒｂ２００２＠ｙ￣ｏｏ．ｃｏｍ．ｏｎ 东北农业大学学报 第４ｌ卷 的马鹿鹿茸）。 ＡＬＴ水平与模型组比较明显降低（Ｒ０．０５），而ＡＳＴ 水平差异不显著（Ｐ＞０．０５），鹿茸粉小剂量组ＡＬＴ、 ＡＳＴ水平与模型组比较差异不显著（Ｐ＞０．０５），结果 见表１。 表１鹿茸粉对酒精急性肝损伤小鼠ＡＬＴ、ＡＳＴ活性的影响 ５６。北京二锅头：北京龙泉四喜酿造有限公司。 血清检测试剂盒：批号２００７１２０４，南京建成 生物工程研究所。 １．１．２实验动物 昆明系小鼠，雄性，６￣８周龄，６０只，２０±１ ｇ， 购自哈尔滨汉方实验动物中心。 １．２试验方法 １．２．１ 酒精急性肝损伤模型的建立 将６０只２０￣１ ｇ健康雄性小鼠随机分为６组， 每组１０只，分别为空白组、模型组、联苯双酯组 １５０ ｍｇ・ｋｇ～，阳性对照组、鹿茸粉小剂量组（５％）、 鹿茸粉中剂量组（１０％）、鹿茸粉大剂量组（１５％ｏ 每１３上午２￣６组小鼠按１０ ｍｇ・ｋｇ 剂量灌胃５６。白 酒１次，第一组灌胃同等剂量的生理盐水；每１３下 午３－６组小鼠按１０ ｍｇ・ｋｇ 剂量分别灌胃给药，空 白组和模型组给予等体积生理盐水，连续７ ｄ；末 次给药后，禁食，不禁水，１６ ｈ后处死小鼠采集血 液样品和肝组织样品，分离血清。 １．２．２血清学指标 谷丙转氨酶（Ａ ）、谷草转氨酶（ＡＳＴ）检测方 法按照试剂盒说明进行。 １．２．３组织病理学检查 取右叶肝脏以１０％中性甲醛固定，常规脱水， 石蜡包埋、切片、ＨＥ染色供常规光镜观察肝组织 病理变化。 １．２．４电镜检测 取米粒大小的一块肝组织，３％戊二醛中固定， １％四氧化锇再固定，丙酮酸逐级脱水，Ｅｐｏｎ８１２包 埋，切片，醋酸铀及枸橼酸双重染色，透射电镜观 察。 １．２．５统计分析 所有试验数据以 ±Ｓ表示，应用ＳＰＳＳ １３．０处 理试验数据。 ２结果与分析 ２．１鹿茸粉对酒精急性肝损伤小鼠血清转氨酶的 影响 与空白组比较，模型组小鼠血清ＡＬＴ、ＡＳＴ水 平显著升高（Ｐ＜０．０１），与模型组比较，鹿茸粉大剂 量组和联苯双酯组均能显著降低小鼠血清中升高的 ＡＬＴ、ＡＳＴ活性（Ｐ＜０．０１），鹿茸粉中剂量组中， Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ ｏｎ ＡＬＴ，ＡＳＴ ｉｎ ａｌｃｏｈｏｌ—ｉｎｔｏｘｉｃａｔｅｄ ｍｉｃｅ （Ｕ・Ｌ ） 注：与酒精模型组比较： Ｐ＜０．０５， Ｐ＜０．０１；与空白组比较： Ｐ＜ ０．０５，”Ｐ＜Ｏ．０１。 Ｎｏｔｅ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｃｏｈｏｌ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ： Ｐ＜０．０５， ａｐ＜０．０１； Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｂｌａｎｋ ｇｒｏｕｐ： Ｐ＜Ｏ．０５．“１９＜０．Ｏ１． ２．２鹿茸粉对酒精急性损伤小鼠肝脏组织病理学 的影响 光镜下可见空白组肝细胞多呈多边形，核大而 圆，肝细胞索呈放射状排列，无脂肪变性和炎症反 应（见图版Ｉ一１）；模型组肝损伤较为严重，主要表 现为肝小叶结构不清，脂肪变性，肝细胞浆疏松， 胞浆透明，肝窦受压、紊乱，肝小叶散在点状坏 死，炎性细胞浸润（见图版Ｉ一２）；与模型组比较鹿 茸粉小剂量组改善不明显，肝细胞坏死、脂肪变 性、炎性浸润仍很严重，但肝细胞肿胀程度略有减 轻（见图版Ｉ一３）；鹿茸粉中剂量组（见图版Ｉ一４）、 大剂量组（见图版Ｉ一５）和联苯双酯组（见图版Ｉ一６） 情况较模型组比较改善较为明显，肝内病灶发生率 下降，肝细胞肿胀、脂肪变性及炎性浸润均减轻， 鹿茸粉大剂量组和联苯双酯组肝小叶轮廓较清晰。 总的说来，鹿茸粉大剂量组的效果优于中剂量组， 但不如联苯双酯组。 第１期 夏彦玲等：鹿茸粉对小鼠酒精急性肝损伤的保护作用 ｌ一空白组；２－模型组；３－鹿茸粉小剂量组；４－鹿茸粉中剂量组；５－鹿茸粉大剂量组；６－联苯双酯组 １－Ｂｌａｎｋ ｇｒｏｕｐ；２－Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ；３－Ｌｏｗ——ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ；４－Ｍｉｄｄｌｅ—＿ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ； ５－Ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ ｕｆ ａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ；６－Ｂｉｆｅｎｄａｔｅ ｇｒｏｕｐ 图版Ｉ 肝组织病理改变（ｘ４００） Ｐｌａｔｅ Ｉ Ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｅａｌ ｃｈａｎｇｅｓ（ｘ４００） ２．３鹿茸粉对酒精急性损伤小鼠肝细胞超微结构 的影响 弥漫散在，有炎性细胞浸润，胆管闭锁，微绒毛 融合（见图版１Ｉ一２）；鹿茸粉小剂量组改善不明显， 线粒体及内质网等细胞器的病理改变略有减轻（见 图版Ⅱ一３）；鹿茸粉中、大剂量组有很大程度的改 善，部分线粒体膜破损，炎性细胞浸润较轻，轻 度异染色质边集，脂滴明显减少，部分细胞有少 量脂滴，胆管微绒毛轻度肿胀，鹿茸粉大剂量组 效果好于中剂量组（见图版Ⅱ一４、５）；而阳性对照 联苯双酯组中，线粒体增多，嵴清晰，稍肿胀，炎 性细胞浸润较轻，脂滴极少，胆管结构正常（图版 Ⅱ一６）。 电镜检测表明，空白组肝细胞形态正常，细胞 器、糖原颗粒丰富，粗面内质网绕线粒体存在，核 仁清晰，核膜清晰完整，核染色质分布均匀，异染 色质和常染色质散在分布，无异常（见图版１Ｉ一１）； 模型组肝细胞胞浆疏松，细胞器分散，线粒体形 态各异，严重肿胀，线粒体膜融合，嵴减少，有 巨线粒体生成，基质密度降低，粗面内质网变化 不明显，部分粗面内质网轻微扩张，脱颗粒，核 膜皱缩，染色质边集，胞质内有大小不等的脂滴 ｌ一空白组；２一模型组；３一鹿茸粉小剂量组；４－鹿茸粉中剂量组；５－鹿茸粉大剂量组；６－联苯双酯组 １－Ｂｌａｎｋ ｇｒｏｕｐ；２－Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ；３－Ｉ，ＯＷ—ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ；４－Ｍｉｄｄｌｅ—ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ； ５－Ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ａｎｔｌｅｒ ｐｏｗｄｅｒ；６－Ｂｉｆｅｎｄａｔｅ ｇｒｏｕｐ 图版Ｈ 肝细胞超微结构的改变（ｘｌｌ ５００） ＰｌａｔｅⅡＬｉｖｅｒ ｃｅｌｌｓ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｃｈａｎｇｅｓ（ｘｌｌ ５００） 东北农业大学学报 第４ｌ卷 ３讨论与结论 乙醇在体内主要经乙醇脱氢酶和过氧化氢酶进 行代谢，当乙醇浓度过高时还可通过内质网的微粒 体乙醇氧化代谢系统（Ｍｉｃｒｏｓｏｍａｌ Ｅｔｈａｎｏｌ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ，ＭＥＯＳ）进行代谢闼。酒精在肝细胞代谢内时 会产生过多的氧应激产物，如ＯＨ一、０ 一、Ｈ ０ 等 自由基，这些自由基可激活磷脂酶及脂质过氧化反 应，降低膜磷脂，改变其通透性和流动性，从而改 变与膜结合的酶、受体和离子通道的微环境，影响 其功能。另外，乙醇及其中间代谢产物乙醛对肝脏 有直接的损害作用，正常情况下，乙醇在体内的代 谢产物乙酸和代谢终产物ＣＯ：和水可以被排出体 害，脂肪变性、气球样病变减轻，炎性细胞明显减 少，各细胞器及细胞质膜的病理改变都有明显的改 善，可见鹿茸粉对受损肝细胞起到了良好的保护作 用。其机制可能是鹿茸粉中的活性成分可以拮抗自 由基导致的细胞质膜损伤而带来的细胞变性或坏 死，抑制炎症反应，并与其修复线粒体、内质网等 细胞器的损伤有关。 ［参考文献］ ［１］李时珍．本草纲目【Ｍ】．下册．赵机，其宗编．北京：宗教文化出版 社 ２００１：５９３—５９８． ［２】李业钊，李航．乙醇代谢酶与乙醇性肝损伤［Ｊ】．医学综述，２００８， １４：２７８８－２７９１． 外，但由于一次性大量饮酒或长期慢性摄入酒精， 超过了肝脏解毒能力，也会导致血液和肝脏中大量 的酒精及乙醛蓄积 。酒精引起急性肝损伤在形态 学上主要表现为肝细胞肿胀气球样变和脂肪变性， ［３】Ｓｔｅｗａｒｔ Ｓ，Ｊｏｎｅｓ Ｄ，Ｄａｙ Ｃ Ｐ．Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ：Ｎｅｗ ｉｎｓＪｉＳｈｔｓ ｉｎｔｏ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ【Ｊ】．Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ， ２００１．７（９１：４０８－４１３． 点状坏死及炎性浸润等，血清学检查可见血清ＡＬＴ 和ＡＳＴ升高［６－８］。 ［４］董学军．酒精性肝病的发病机制及其相关因素研究现状Ⅲ．中 国保健，２００６，１４（２２）：４５—４６． ［５］韩婷，井源，吴静．酒精性脂肪肝的肝损伤机制研究近况［Ｊ】．实 用肝脏病杂志，２００７，１０（４）：２７９—２８２． 本试验中，经５６。白酒处理后，模型组与空白 组比较，小鼠血清ＡＬＴ和ＡＳＴ水平均明显升高（Ｐ＜ ０．０１）；鹿茸粉小剂量组与模型组比较差异不显著 ［６】夏彦玲．鹿茸对小鼠急性肝损伤保护作用的显微及超微结构研 究［Ｄ】．哈尔滨：东北林业大学，２００９：３７—４１． 【７］何映，邱银生，汪晖，等．体内外急性酒精性肝损伤模型的研究 ［Ｊ１．中国药师，２００６，９（２）：１ １５一ｌ１７． （尸＞０．０５）；鹿茸粉大剂量组和联苯双酯组与模型组 比较，血清中ＡＩＪＴ和ＡＳＴ下降程度明显（Ｐ＜０．０１）， 鹿茸粉中剂量组也有不同程度的改善；石蜡切片及 电镜超薄切片观察亦显示鹿茸粉中剂量组、大剂量 组可明显减轻酒精急性肝损伤小鼠的肝脏病理损 ［８］徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学［Ｍ】．３版．北京：人民卫 生出版社，２００２：１３４６一ｌ３４７．
