山西医药杂志２０１０年４月第３９卷第４期下半月 Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｐｒｉｌ ２０１０，Ｖｏ１．３９，Ｎｏ．４ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ・ ３７３・ ・药物研究・ 胶束电动色谱法同时测定北五味子中五味子甲乙素的含量 中国医科大学附属第一医院（１１０００１） 宁 婷 王 秋 北五味子［Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｔｕｅｃｚ．）Ｂａｉｌ１］，习称五 味子，其主要成分以五味子甲素和五味子乙素为代表 目 前报道的同时测定五味子甲、乙素的方法均为高效液相色 超声提取４０ ｍｉｎ，放至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，０．４５ ｍ微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。 ２．２．２标准曲线的制备：精密称取五味子甲、乙素储备液 谱法｜】］。鉴于高效液相色谱法费用较高的缺点，本文主要 目的是寻找～种更为高效、简便、试剂费用低的毛细管电泳 定量分析方法。 １实验条件 １．１ 药品与试剂：五味子甲乙素对照品（中国药品生物制 品检定所）；不同产地的北五味子干燥果实（辽宁丹东、黑龙 江佳木斯、黑龙江哈尔滨）。十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）（分析 纯，进口分装，武汉市鸿兴化工公司）；胆酸钠（Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｏ～ ｌａｔｅ，ＳＣ）（Ｓｉｇｍａ产品），其他试剂均为分析纯。 １．２ 电泳条件：ＨＰ一３Ｄ毛细管电泳仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公 司），紫外二极管阵列检测器；熔融石英毛细管总长３６．５ ｃｍ，有效长为３０．５ ｃｍ，内径为５０ ｍ；压力进样，进样时间 ５ Ｓ；进压压力５ ｋＰａ。操作电压２Ｏ ｋＶ；温度２５。Ｃ；检测波 长２５０ ｎｍ。各样品测定之间．依次采用重馏水和运行溶液 冲洗２ ｍｉｎ。 ２方法与结果 ２．１分离条件的优化 ２．１．１胶束溶液种类的选择：比较了ＳＤＳ和ＳＣ对五味子 甲、乙素分离的影响，结果发现无论选择ＳＤＳ还是ＳＣ均产 生良好的分离度，由于ＳＤＳ价廉易得，后续试验采用ＳＤＳ 对分离条件进行优化。 ２．１．２ ＳＤＳ浓度的影响：实验发现，当ＳＤＳ浓度逐渐增大 时，五味子甲乙素的分离度逐渐增加，但ＳＤＳ浓度过大时， 由于电流过大，造成基线不稳．背景偏大，综合考虑，试验选 择ＳＤＳ浓度为３０ ｍｍｏｌ／Ｉ 。 ２．１．３缓冲盐种类及ｐＨ的选择：实验比较了磷酸盐（２０ ｍｍｏｌ／Ｉ ，ｐＨ一７．２）及Ｔｒｉｓ缓冲液（２０ ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ＝８．５） 对分离的影响，发现磷酸盐缓冲液的电流较之Ｔｒｉｓ缓冲液 的大，这易造成基线波动，因此实验选择了２０ ｍｍｏｌ／Ｌ的 Ｔｒｉｓ缓冲液进行分离试验。 ２．１．４分离条件的确定：经各项考察后，最终确定的毛细管运 行缓冲溶液如下：２０ ｍｒｎｏｌ／Ｉ 的Ｔｆｉｓ缓冲液配置的３０ ｍｎ￣ｌ／Ｌ ＳＤＳ胶束溶液，五味子甲、乙素按照其亲脂性的不同而分离。 ２．２定量分析 ２．２．１ 溶液配制：五味子甲、乙素储备液的配置：精密称取 ５０ ｍｇ五味子甲素、７５ ｍｇ五味子乙素对照品于５Ｏ ｍＬ容 量瓶中，用甲醇定容，得储备液。 供试品溶液的制备将北五味子药材粉碎后，精密称取 北五昧子药材粗粉１ ｇ，置２５ ｍＬ量瓶中，加入甲醇２Ｏ ｍＩ ， 适量，用甲醇：水（９０：ｉ０）进行系列浓度溶液配制，在最优 电泳条件下进行分离测定，以峰面积（Ａ）对浓度（Ｃ）进行 回归计算，得五味子甲素回归方程为：Ａ一６２１０．５ Ｃ～ ３２３４．８，ｒ＝０．９９９１，线性范围为５．２～１０４．０ ｍｇ／Ｉ ；五味子 乙素的回归方程为：Ａ＝５７７５．３ Ｃ一２１０２．５，ｒ一０．９９９３，线 性范围为７．５～１５０．０ ｎａｇ／Ｌ。 ２．２．３精密度试验：精密吸取供试品溶液，重复进样，将峰 面积代人回归方程，求其含量，重复５次，五味子甲、乙素 ＲＳＤ分别为２．０７ 和１．４２ 。 ２．２．４稳定性试验：取供试品溶液放置１、２、４、８、２４ ｈ，测 定峰面积，五味子甲、乙素ＲＳＤ分别为１．７９％和２．１２ 。 ２．２．５加样回收率：将五味子甲、乙素对照品分别加入到已 知含量的五味子样品溶液中，按照“供试品溶液制备”项下方 法制备，测定回收率，结果五味子甲素平均为９９．３ ，ＲＳＤ 为３．９９ ；五味子乙素平均为９９．４ ．ＲＳＤ为４．】２ 。 ２．２．６样品测定：精密称取不同产地北五味子药材粗粉各 １ ｇ（ ＝３），精密称定。按照“供试品溶液制备”项下制备， 测定峰面积，按标准曲线求算五味子甲、乙素的含量，结果 见表１。 表ｌ 不同产地北五味子果实中五味子甲乙素的含量（ ） ３讨 论 由于五味子甲，乙素均为电中性物质，毛细管区带电泳 无法将其分离，但考虑到二者亲脂性的不同，可以采用在运 行溶液中加入胶束的方式对二者进行分离。由于五味子 甲、乙素与胶束亲和程度不同，导致二者分离。通过对分离 条件的优化，不仅取得了良好的分离效果，而且分离时间相 对于文献［２］报道的液相色谱法（２ｏ ｒａｉｎ左右）大大缩短。 通过定量分析方法的确证及对实际样品的测定，表明该方 法准确可靠、方便快捷、试验费用低，为评价五味子药材的 含量提供了参考依据。 参考文献 １吕邵娃，管庆霞．李永吉．ＨＰＩ Ｃ测定利肝隆片中五味子甲素和 五味子乙素含量．中成药，２００６，２８（５）：６６２—６６４． （收稿日期：２００９—０９—２８） 作者简介：宁婷，女，１９８１年４月生，药师，中国医科大学附 属第一医院，１１０００１
