第２ｌ卷第１期 江苏大学学报（医学版） Ｖ０１．２１ Ｎｏ．１ ２０１１年１月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｊａｎ．２０１１ ５－Ａｚａ—ＣｄＲ对肾细胞癌Ｃａｋｉ一１细胞生长 及Ｅ一钙黏蛋白基因表达的影响 何鸿保 ，孙浩 ，姚宏伟 ，唐爱国 （１．江苏大学临床医学院，江苏镇江２１２００１；２．江苏大学附属医院泌尿外科，江苏镇江２１２００１） ［摘要］ 目的：研究甲基化抑制剂５一氮杂－２ 一脱氧胞苷（５－Ａｚａ—ＣｄＲ）对肾细胞癌细胞株Ｃａｋｉ一１增殖抑制作用、对Ｅ 钙黏蛋白（Ｅ－ｃａｄｈｅｆｉｎ，Ｅ—ｃａｄ）甲基化状态及Ｅ—ｃａｄ蛋白状态的影响。方法：不同浓度５－Ａｚａ—ＣｄＲ处理。肾细胞癌细胞株 Ｃａｋｉ・１后，四甲基偶氮唑盐（ＭｑＴ）比色实验观察细胞经药物处理前后的生长活性；甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｉａｌ ＰＣＲ，ＭＳＰ）检测细胞处理前后Ｅ—ｃａｄ基因的甲基化状态；蛋白质印迹法检测５一Ａｚａ—ＣｄＲ处理细胞前后Ｅ—ｃａｄ蛋 白的表达。结果：５－Ａｚａ—ＣｄＲ能抑制肾细胞癌细胞株Ｃａｋｉ一１的增殖；未经药物处理组的基因高甲基化，经１０ ｍｏｌ／Ｌ ５－Ａｚａ・ＣｄＲ处理７２ ｈ，Ｅ－ｃｄａ基因启动子区域高甲基化得到逆转，同时Ｅ—ｃａｄ蛋白表达也得到增强。结论：５－Ａｚａ—ＣｄＲ 能够有效逆转Ｃａｋｉ一１细胞Ｅ—ｃａｄ基因的异常甲基化，恢复Ｅ—ｃａｄ蛋白表达。 ［关键词】５－氮杂－２ 一脱氧胞苷；肾细胞癌；Ｅ．钙黏蛋白；ＤＮＡ甲基化； ［中图分类号】 Ｒ７３７．１１ ［文献标志码］ Ａ ［文章编号］ １６７１—７７８３（２０１１）０１—００６５—０４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ５－－Ａｚａ－－ＣｄＲ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｌｉｎｅ Ｃａｋｉ－１ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ ｇｅｎｅ ＨＥ Ｈｏｎｇ．ｂａｏ ，ＳＵＮ Ｈａｏ ，ＹＡＯ Ｈｏｎｇ．ｗｅｉ ，ＴＡＮＧ Ａｉ—ｇｕｏ （ｉ．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ Ｊｉａｎｇｓｕ ２１２００１；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＵｒｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔｌａ ｏｆ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉ－ ｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅ￣ｉａｎｇ Ｊｉａｎｇｓｕ ２１２００１，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ５－Ａｚａ－２ －ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ Ｃａｋｉ・１ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ（Ｅ－ｃａｄ）ｇｅｎｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｒｅｎａｌ ｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ Ｃａｋｉ．１ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ５．Ａｚａ．ＣｄＲ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＭＴＦ ａｓｓａｙ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ Ｅ・ｃａｄ ｇｅｎｅ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｉａｌ ＰＣＲ（ＭＳＰ）．Ｔｈｅ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ Ｅ—ｃａｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ５．Ａｚａ—ＣｄＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：５一 Ａｚａ—ＣｄＲ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃａｋｉ一１．Ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ Ｅ．ｃａｄ ｇｅｎｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ ｗａｓ ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｗｉｔｈ １０一。ｍｏｌ／Ｌ ５－Ａｚａ—ＣｄＲ ｔｒｅａｔｅｄ ｆｏｒ ７２ ｈ，ｗｈｉｌｅ Ｅ－ｃａｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｗａｓ ａｌｓｏ ｅｎｈａｎｃｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：５－Ａｚａ—ＣｄＲ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｃａｕｓｅｄ ｔｈｅ ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅ—ｃａｄ ｇｅｎｅ，ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｅｄ ｔｈｅ Ｅ—ｃａｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ ５－Ａｚａ－２ －ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ；ｒｅｎａｌ ｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ；Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ；ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ 肾细胞癌的发病率居泌尿系统肿瘤的第二位， 癌基因失活的主要方式有基因的缺失、突变和启动 目前的治疗仍以根治性手术为主，但术后复发率达 子区域的过甲基化等 。研究发现，Ｅ．钙黏蛋白 ２０％以上，且放化疗效果不佳，因此迫切需要早期诊 （Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎ，Ｅ．ｃａｄ）是一类介导细胞之间互相黏附 断方法和其他有效的治疗。肾细胞癌的发生、发展 的钙依赖性跨膜糖蛋白，它在胚胎发育、形态发生、 与多种因素有关，抑癌基因失活是关键因素之一，抑 上皮极性和完整性维持等方面起着重要作用 。 ［基金项目］江苏大学临床医学科技发展基金项目（ＪＬＹ２００５００１５） ［作者简介］何鸿保（１９８３一），男，江苏东海人，硕士研究生；孙浩（通讯作者），主任医师，硕士生导师，Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｅｙｉｚｈｏｕ５２０＠１６３．ｃｏｍ 江苏大学学报（医学版） 第２１卷 近年来研究表明，Ｅ—ｃａｄ和肿瘤细胞浸润、转移有着 重要关系，其在胃癌、肠癌、前列腺癌及乳腺小叶癌 组织中表达下调，Ｅ ｃａｄ基因启动子甲基化是其表 达缺失的主要原因 。ＤＮＡ甲基化是一种发生在 试剂盒说明书（大连ＴａＫａＲａ公司）提取各组ＤＮＡ， 基因组ＤＮＡ中富含ＣＧ区的异常甲基化首先要经 过亚硫酸氢钠化学修饰作用，使未甲基化的胞嘧啶 （Ｃ）变为尿嘧啶（Ｕ），而已甲基化的胞嘧啶（Ｃ ）则 ＣｐＧ二核苷酸上对胞嘧啶的共价修饰，是基因在转 录水平的方式之一，它不存在ＤＮＡ序列改变， 是表观遗传学的一种 。为探讨Ｅ．ｃａｄ基因甲基化 与肾细胞癌的关系及临床意义，我们进行了相关研 不会改变。采用甲基化修饰试剂盒（北京天漠科技 公司）处理已提取的各样本ＤＮＡ。ＤＮＡ甲基化特异 性聚合酶链反应：根据文献［５］合成寡核苷酸引物 （上海生工生物工程有限公司合成），引物序列，Ｅ． 究，现报告如下。 １材料和方法 １．１ 材料 牛血清（杭州四季青公司）；ＭｃＣｏｙ Ｓ ５Ａ培养基 （美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）、胰酶（武汉博士德公司）； ５一氮杂＿２ ．脱氧胞苷（５－Ａｚ８－ＣｄＲ）、四甲基偶氮唑盐 （ｎＴｒ）及二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）（美国Ｓｉｇｍａ公司）， ５一Ａｚａ—ＣｄＲ用培养基充分溶解后保存于一７０℃冰箱 备用；通用ＤＮＡ提取试剂盒３．０及ＴａＫａＲａ Ｅｘ Ｔａｑ （大连宝生物工程有限公司）；ＤＮＡ甲基化修饰试剂 盒（北京天漠科技开发有限公司）；鼠抗人一抗、羊 抗鼠二抗（美国赛信通公司）。 １．２ 方 法 １．２．１ 肾细胞癌细胞株的培养 肾细胞癌细胞株 Ｃａｋｉ．１购于上海中科院细胞库，培养于含１０％胎牛 血清、１００ Ｕ／ｍｌ青霉素、１００ Ｕ／ｍｌ链霉素的ＭｃＣｏｙ Ｓ ５Ａ培养基中，饱和湿度，３７ ｃＩＣ，５％ＣＯ２孵育箱中， 每３天更换培养液１次，待细胞铺满底壁的８５％～ ９０％时，按１：２传代，取呈对数生长期的细胞用于 实验。 １．２．２ Ｍ１ｖｒ实验检测细胞增殖活性取呈对数生 长期细胞以每孔２ ５００个细胞密度接种于４块９６ 孔板中，过夜贴壁后，加入含有５－Ａｚａ—ＣｄＲ不同终浓 度的培养基，每孔２００ ｔ＊ｌ，每组设３个复孔，并设不 加药的对照孔和不接种细胞的调零孔。药物和培养 液每２４ ｈ更换１次，每天取出１板，加人５ ｇ／Ｌ的 ＭＴＦ溶液２０ Ｉ，３７℃，５％ＣＯ２培养箱中继续培养 ４ ｈ后弃去上清，每孔加入１５０ ｔ＊ｌ ＤＭＳＯ，振荡 １０ ｒａｉｎ充分溶解结晶，置酶联免疫检测仪上测定在 波长４９０ ｎｍ处的光密度值，细胞生存率以平均光密 度值分析，以时间为横坐标，以平均光密度值为纵坐 标，绘制生长曲线图。 １．２．３ ＤＮＡ特异性甲基化ＰＣＲ（ＭＳＰ）检测ＣｐＧ岛 甲基化取用１０ ｍｏｌ／Ｌ的５－ｎｚ３．ＣｄＲ处理７２ ｈ 细胞以及未经药物处理的对照组细胞，按ＤＮＡ提取 ｃａｄ—Ｍ， ５ －ｒＩＹＩ１ＡＧＧｒ丌ＡＧＡＧＧＧ１丫ｒＡＴｃＧＣＧＴ一３ （正 义）， ５ 一ＴＡＡＣＴＡＡＡＡＡＴＴＣＡＣＣＴＡＣＣＧＡＣ一３ （反 义），扩增产物片段长度１１６ ｂｐ。ＰＣＲ反应条件，９５ ℃预变性１０ ｒａｉｎ，９５℃变性３０ Ｓ，５７℃退火４５ Ｓ； ７２℃延伸３０ Ｓ，共３５个循环后，７２℃延伸１０ ｍｉｎ；Ｅ． ｃａｄ－Ｕ，５ －ＴＡＡＴＩＴＹＡＧＧＴＴＡＧＡＧＧＧＴＦＡＴＦＧＴ一３ （正 义），５ 一ＣＡＣＡＡＣＣＡＡＴＣＡＡＣＡＡＣＡＣＡ．３ （反义），扩 增产物片段长度９７ ｂｐ。反应条件，９５℃预变性 １０ ｍｉｎ，９５℃变性３０ Ｓ，５３ ｑＣ退火４５ Ｓ；７２℃延伸 ３０ Ｓ，共３５个循环后，７２℃延伸１０ ｒａｉｎ。Ｅ．ｃａｄ．Ｍ 和Ｅ—ｃａｄ—Ｕ分别用于扩增Ｅ—ｃａｄ基因ＣｐＧ岛甲基化 和非甲基化的等位基因。扩增产物于２．５ ｇ／Ｌ琼脂 糖凝胶电泳，紫外线凝胶成像系统采集图像，根据 ＤＮＡ条带判断结果。 １．２．４蛋白质印迹法检测５－Ａｚａ．ＣｄＲ干预前后Ｅ． ｃａｄ蛋白的表达变化 取用１０～ｍ０ｌ／Ｌ的５．Ａｚａ． ＣｄＲ处理７２ ｈ的实验组细胞和未经药物处理的对 照组细胞，严格按照膜提取试剂盒操作说明书（上 海贝博膜蛋白提取试剂盒）提取Ｅ．ｃａｄ蛋白，用ＢＣＡ 法对所提取的蛋白进行定量。膜在一抗Ｅ．ｃａｄ单克 隆抗体中室温下孵育２ ｈ，ＰＢＳ洗涤加二抗室温下 ２ ｈ，碱性磷酸酶染色，自动电泳凝胶成像分析系统 下成像。 １．２．５统计学处理采用ＳＰＳＳ１３．０统计软件进 行单因素方差分析，进一步两两比较采用ＬＳＤ ｔ检 验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ２结果 ２。１ 不同浓度５一Ａｚａ．ＣｄＲ处理后Ｃａｋｉ．１细胞的增 殖活性 ＭＴＹ检测结果显示，时间不变，５－Ａｚａ．ＣｄＲ对 Ｃａｋｉ一１增殖的抑制率随浓度的增大而增强，且不同 浓度组问的抑制率比较差异有统计学意义（Ｐ＜ ０．０５）；浓度不变，５－Ａｚａ—ＣｄＲ对Ｃａｋｉ—ｌ增殖的抑制 率随时问延长而增强，且不同作用时间的组问抑制 率比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见图１。 江苏大学学报（医学版） 第２１卷 的Ｃａｋｉ一１细胞中Ｅ—ｃａｄ基因启动子区域显示为高甲 基化状态，而经５－Ａｚａ．ＣｄＲ处理后，５－Ａｚａ．ＣｄＲ基因启 ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，２０１０，１７９９ （１０—１２）：７５０—７５９． Ｃｈｅｎ ＣＬ，Ｌｉｕ ＳＳ，Ｗｏｎｇ ＬＣ，ｅｔ ａ１．Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｉｓ ｓｉｌｅｎｃｅｄ ｂｙ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ 动子区域高甲基化状态得到逆转，提示５－Ａｚａ—ＣｄＲ可 逆转Ｅ—ｃａｄ基因高甲基化状态而抑制Ｃａｋｉ－１肾细胞 癌细胞株增殖。蛋白质印迹结果表明经５－Ａｚａ—ＣｄＲ 处理后，Ｅ—ｃａｄ蛋白表达也增强。提示Ｅ－ｃａｄ基因启 动子ＣｐＧ岛甲基化可能参与肾癌的发生以及转移。 在国外，５－Ａｚａ．ＣｄＲ已经用于临床治疗白血病，提示可 ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｕｒｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２００３，３９（４）： ５１７—５２３． Ｂｅｒｘ Ｇ，ｖａｎ Ｒｏｙ Ｆ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｄ— ｈｅｒｉｎ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒ— ｓｐｅｃｔ Ｂｉｏｌ，２００９，１（６）：ａ００３１２９． Ｂｅａｖｏｎ ＩＲ．Ｔｈｅ Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎ—ｃａｔｅｎｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｎ ｔｕｍｏｕｒ 进一步探讨Ｅ—ｃａｄ基因甲基化与肾癌的发病机制及 肾癌进展、预后之间的关系，为探讨肾细胞癌发病机 ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２０００，３６（１３）：１６０７—１６２０． Ｓｚｙｆ Ｍ．ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｎａｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ａｓ ｔａｒｇｅｔｓ 制及寻求临床治疗新靶点提供理论依据。 ［参考文献］ ［１］ 陶美满，孙浩，田福起，等．５－Ａｚａ—ＣｄＲ对人。肾癌ＯＳ— ｆｏｒ ａｎｔｉｅａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃ），２００５， ７０（５）：５３３—５４９． Ａｕｅｒｋａｆｉ Ｅ１．Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅｓ ｐｌ６ ｒ【ｒＬ ＲＣ ２细胞生长及 一连环蛋白表达的影响［Ｊ］．江苏 ｒｌ ｒｌ ｒｌ ｒｌ 大学学报：医学版，２００９，１９（３）：２５３—２５５． ］Ｊ ］］Ｊ ５ ６ ７ ８ １ｊ ９ ］（ＩＮＫ４ａ），ｐ２７（Ｋｉｐ１）ａｎｄ Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎ ｉｎ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ］ｊ ［２］ｖａｎ Ｒｏｙ Ｆ，Ｂｅｒｘ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｃｅｌｌ－ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅ— ｃｕｌｅ Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ，２００８，６５（２３）： ３７５６—３７８８． ［Ｊ］．Ｏｒａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００６，４２（１）：５—１３． Ｎａｍ ＪＳ，Ｉｎｏ Ｙ，Ｋａｎａｉ Ｙ，ｅｔ ａ１．５－Ａｚａ一２＇－ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ ｒｅｓｔｏｒｅｓ ｔｈｅ Ｅ－－ｃａｄｈｅｆｉｎ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｅ－－ｃａｄｈｅｆｉｎ・－ｓｉｌｅｎｃｅｄ ［３］ Ｙａｐ ＡＳ，Ｃｒａｍｐｔｏｎ ＭＳ，Ｈａｒｄｉｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｍａｋｉｎｇ ａｎｄ ｂｒｅａｋｉｎｇ ｃｏｎｔａｃｔｓ：ｔｈｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｃａｄｈｅｒｉｎ ｒｅｇｕｌａ— ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｓ ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，２００４，２１（１）：４９—５６． ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２００７，１９（５）：５０８—５１４． ［４］ Ｓｚｙｆ Ｍ．ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｂｅｄ ｂｙ ［收稿日期］２０１０—１１—２０ ［编辑］ 郭欣 本刊征稿启事 《江苏大学学报（医学版）》是中国科技核心期刊（中国科技论文统计源期刊），并被美国《化学文摘》 （ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｂｓｔｒａｃｔｓ，ＣＡ），《剑桥科学文摘》（ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ａｂｓｔｒａｃｔｓ，ＣＳＡ），波兰《哥白尼索引》（ｉｎｄｅｘ ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ，ＩＣ），中国科技论文与引文数据库（ＣＳＴＰＣＤ），中文生物医学期刊文献数据库（ＣＭＣＣ），中国学 术期刊网全文数据库（ＣＮＫＩ），万方数据数字化期刊群等数据库收录。 为了更好地开展国内外学术交流，促进医药卫生事业的发展，现《江苏大学学报（医学版）》对外征稿， 凡符合本刊稿件要求（见ｈｔｔｐ：／／ｚｚｓ．ｕｊｓ．ｅｄｕ．ｃｎ／ｙｘｂ稿约），均可向本刊投稿。目前本刊欢迎四大类稿件： ①基础实验研究；②各级科研课题稿件；③临床前瞻性研究稿件；④创新性的新方法新技术应用报告。凡属 于国家自然科学基金及其他部省级科研基金资助的来稿，本刊将在刊发时问和费用上给予优先优惠。作者 投稿时先登录网站ｚｊｙｚ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ注册个人相关信息并上传电子稿。～周内，如作者收到初审合格的电 子邮件通知，再及时从邮局汇寄审稿费，同时将打印稿和投稿介绍信寄送编辑部。编辑部收到打印稿后，将 送两名异地学科专家评审。 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