超敏-C反应蛋白检测（免疫比浊法）
一、用途
本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中超敏-C反应蛋白（HS-CRP）的含量。 二、临床意义 （一）概述
C-反应蛋白（CRP）是急性时相反应蛋白，由5个完全相同的非糖基化的亚单位构成，分子量为115000-140000D。在细胞因子IL-6家族诱导下，CRP在肝中合成迅速。在急性时相反应高峰时肝合成蛋白质能力的20%是CRP的合成。C-反应蛋白能激活补体，引发调理作用，增强细胞的吞噬功能，对血小板凝集和血块收缩有抑制作用。 （二）临床意义
1. hs-CRP与心血管疾病 （1）hs-CRP可作为ACS的预后指标
重度不稳定心绞痛（UAP）患者入院时，若CRP浓度≥3mg/L，其心绞痛的复发、冠状动脉血管置换术、心肌梗死和心血管疾病致死等心血管事件发生率比CRP<3mg/L的患者高.
CRP≥3mg/L的UAP患者出院时有较高的再住院及发生心肌梗死的危险。出院时测定hs-CRP比入院时测定能更好地预测90天的不良后果.
此外，hs-CRP有助于鉴别出心肌肌钙蛋白（cTn）阴性而死亡率增高的患者。因此Morrow等认为，应当考虑联合使用cTn和hs-CRP来评估 ACS危险程度。 （2）hs-CRP是未来发生冠脉事件的预测指标
前瞻性研究显示，hs-CRP是已知冠心病患者未来心血管病发病和死亡的预测指标。
高水平的hs-CRP患者未来发生卒中危险增加2倍，未来发生心肌梗死危险增加3倍，未来发生周围血管疾病的危险增加4倍。
（3）hs-CRP与其他生化指标对冠心病危险的预测价值
hs-CRP对冠心病的预测价值明显高于的传统的冠心病危险因素如血脂、脂蛋白和载脂蛋白.如总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白AI和B（apoAI、apoB） 。
诸多冠心病危险因素，如肥胖、高血压、糖尿病、冠心病家族史及各种生化指标，仅仅只有hs-CRP和TC/HDL-C有单独的预测价值 .
另有研究发现，hs-CRP能鉴别那些血脂水平在合适范围的个体冠心病发生的危险性。
（4）在冠心病的危险性评估时，hs-CRP与血脂指标均是的变量，如将两者同时检测并进行联合分析，其意义更大 。
与TC和hs-CRP在正常值75%以下的人相比，单独TC增高的人危险性增加2.3倍，单独hs-CRP增高的人危险性增加1.5倍，而TC和hs-CRP均增高的人群，发生冠心病的危险性增加5倍。
因此TC和hs-CRP两个危险因素的联合作用远远大于单个危险因素所产生的影响。
2. hs-CRP与糖尿病
近年的研究发现，在2型糖尿病的患者中，血清CRP水平明显增高，且与大血管病变、微血管病变等并发症密切相关.
2型糖尿病患者中CRP水平增高，且与尿白蛋白排泄相关，而微量白蛋白尿目前认为是筛选早期DN的主要指标，亦是T1DM和T2DM患者心血管疾病发生率及死亡率显著升高的标志。因而，CRP水平可作为DN发生、发展及心血管疾病等终点事件发生的预测指标之一。
因此CRP水平较BUN和SCr可更及时地反应糖尿病肾脏损害的程度,对糖尿病肾病发生、发展的早期预测具有重要意义。
3. hs-CRP与炎症
（1）CRP作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗塞、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高，并有成倍增长之势。病变好转时，又迅速降至正常，其
升高幅度与感染的程度呈正相关。
（2）CRP与其它炎症因子的相关性： CRP与其它炎症因子如白细胞总数、红细胞沉降率和多形核白细胞等具有密切相关性。CRP与WBC存在正相关。在炎症反应中起着积极作用，使人体具有非特异性抵抗力。在患者疾病发作时，CRP可早
于WBC而上升，恢复正常也很快。故具有极高的敏感性。 （3）CRP可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断：一旦发生炎症，CRP水平即升高，而病毒性感染CRP大都正常。 脓毒血症CRP迅速升高，而依赖血培养则至少需要48小时，且其阳性率不高。又如CRP能快速有效地检测细菌性脑膜炎，其阳性率达99％。
（4）恶性肿瘤患者CRP大都升高。如CRP与AFP的联合检测，可用于肝癌与肝脏良性疾病的鉴别诊断。CRP测定用于肿瘤的治疗和预后有积极意义。手术前CRP上升，手术后则下降，且其反应不受放疗、化疗和皮质激素治疗的影响，有助于临床评估肿瘤的进程。 。 （5）用于评估急性胰腺炎的程度。
当CRP高于250mg/L时，则可提示广泛坏死性胰腺炎. （三）医学决定水平
1. 当CRP浓度在3到10mg/L时，可作为心血管危险因素评估
2. 当CRP浓度在10到20mg/L时，可作为儿科医院判断儿
童病毒还是细菌感染的指标
3. 当CRP浓度＞20mg/L时，可作为炎症反应的监测。 三、检验原理
样品中高敏C－反应蛋白与结合在乳胶颗粒表面的羊抗人C－反应蛋白抗体结合，产生抗原抗体反应，使胶乳颗粒形成凝集，产生一定浊度。浊度高低反映样品中高敏C－反应蛋白的含量，通过与同样处理的校准品比较，即可计算出样品中高敏C－反应蛋白含量。 四、样品
血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
HS-CRP测定样品为空腹血清、血浆（肝素或EDTA抗凝）。样品应在低温条件下运输保存，样品中高敏C－反应蛋白在2～8℃保存可稳定5天，－20℃保存可稳定30天。 五、试剂 （一）试剂组成
R1：试剂1 胶乳溶液 R2：试剂2 胶乳溶液 高敏C－反应蛋白多点校准品（0.5ml×6） ＞0.5mg/ml 标示值见瓶签 ＞0.1mg/ml 不同批号试剂中各组份不能互换。 （二）试剂准备
R1和R2试剂为即用型液体试剂，开瓶装载即可使用，用后应及时冷藏保存。 （三）试剂的保存及稳定性
1. 不能冰冻试剂。
2. 未开瓶的R1和R2试剂应在2～8℃密闭避光贮存，稳定期为瓶签标示的有效期。开瓶后的试剂应在2～8℃保存，稳定期为30天。
（四）试剂性能可接受的指标
空白吸光度：试剂空白在主波长570nm、副波长800nm处，10mm光径下，吸光度值≤1.000。 （五）试剂使用中的注意事项
1. 严格按照试剂说明书的要求使用试剂。
2. 试剂2～8℃密闭避光贮存可稳定至瓶签标示的有效期。对超过有效期的试剂不能使用。
3. 严禁放置0℃以下保存。
4. 试剂开瓶后，如果长期放置，会吸收空气中的二氧化碳，导致pH 值下降，造成测定值不准确，因此请尽快使用。
5. 当试剂变混浊或被污染或空白吸光度值＞1.000时，表明试剂已失效，应弃去。
6. 因胶乳放置一段时间后可能会下沉，请每隔7天对R1和R2混匀。混匀时避免产生气泡。
7. 装载试剂时防止产生气泡，否则结果无法保证。 8. 不同批号的试剂之间尽管批间差很小，但仍然不能混用，否则试剂的稳定性将无法保证。 六、预防危险发生的注意事项
使用时应避免与人体接触，当试剂误入口中或眼中，或者附着到皮肤上的时候，请立即用大量清水冲洗，如有必要，请接受医生的治疗。
七、处理废弃物时的注意事项
试剂反应后所产生的废液及使用后的包装材料应集中收集后按照相关法规进行废物处理。 六、操作步骤
1. 基本参数
方 法：终点法 样品/试剂：3/200 主波长：570nm 反应温度：37℃
副波长：800nm 反应时间：10min 2. 操作 （1）工作曲线绘制
将校准品浓度由低到高顺序排列后，按下表操作： 加入物 校准品（μl） 试剂R1（μl）
C1 6
C2 6
C3 6
C4 6
C5 6
C6 6
300 300 300 300 300 300
混匀，37℃恒温1分钟，570nm波长处以空白管调零测定吸光度A1，37℃恒温4分钟。 试剂R2（μl）
100 100 100 100 100 100
混匀，37℃恒温5分钟，570nm波长处测定吸光度A2，计算△A=A2-A1，绘制校准曲线图。 （2）样品测定 加入物 样 品（μl）
空白（B） --
测定（U） 6 -- 300
蒸馏水/生理盐水（μ
6
l）
试剂R1（μl）
300
混匀，37℃恒温1分钟，570nm波长处以空白管调零测定吸光度A1，37℃恒温4分钟。 试剂R2（μl）
100
100
混匀，37℃恒温5分钟，570nm波长处测定吸光度A2，计
算△A=A2-A1。 3. 操作流程图
空白调零 时间: 温度:37℃
测 定 读 数
空白读数 主波长: 570nm
副波长: 800nm
1分钟 R1:300μl 样品:6μl
4分钟 5分钟 R2:100μl
4. 计算
使用多点非线性/半对数校准模式，以样条函数为计算模式，根据校准品的值与吸光度变化值作剂量/响应曲线，样品中HS-CRP的含量可根据其吸光度变化值在剂量/响应曲线上计算出。 七、参考值范围
＜3.0mg/L 八、注意事项
（一）本试剂尽管具有较好的抗交叉污染能力，但仍应根据仪器性能及实验室条件做好防止交叉污染的工作。 （二）试剂与样品用量可根据不同仪器的需要，在试剂样品体积比例不变的条件下，适当增加或减少试剂与样品的用量。
（三）采用必要的预防措施使用试剂，试剂使用后应立即盖
紧瓶盖，避免污染。
（四）准确的结果取决于准确校正的仪器、温度及时间的控制。
（五）药物、抗凝剂、促凝剂、分离胶等其他物质都可能对测定值造成无法预知的干扰。当怀疑标本存在这些干扰物质的影响时，应停药后或采用无任何添加剂的血清进行测定。 九、安全性提示
血清等样品可能含有病毒、细菌等病源微生物，操作者有被感染的潜在危险性，操作时应采取防范措施；试剂反应后所产生的废液及使用后的包装材料应集中收集后按照相关法规进行废物处理。
