1. 胃癌组织切片(2014/4,性别不明)
2. p-ACC/p-AMPK/Bmi抗体每个5ml的抗体稀释液
3. DAB显色剂每个5ml ddH2O,5d，共15ml,15d试剂1、2、3
4. 柠檬酸盐缓冲液（中杉金桥）
5. PBS缓冲液（中杉金桥）
6. 一抗稀释液（中杉金桥-4℃保存）
7. 二抗（中杉金桥-4℃保存）
8. 过氧化氢
9. 二甲苯，85%、95%、100%酒精，
烘箱
1. 脱蜡：取切片在70℃烘箱中烘烤90min（注意时间不能过长，否则容易导致边缘组织脱水出现非特异性阳性显色）。把二甲苯Ⅰ拿到烘箱旁边（避免石蜡在室温中重新凝固）将烘好的切片放在二甲苯Ⅰ中浸泡10min.
2. 水化：依次在二甲苯Ⅱ10min，100%酒精5min,95%酒精中5min，85%酒精中5min浸泡过缸，注意在换缸前要将残留的试剂沥干。过完后在自来水中清洗3-4次
至清亮为止，注意用力不要过猛而掉片。
3. 消除内源性过氧化物酶：在自来水中清洗15遍后，用新鲜的过氧化氢浸泡8min，再用ddH2O清洗15遍
4. 修复抗原：用柠檬酸盐缓冲液在中高火加热15min（因为在制作切片的过程重要用甲醛固定，醛基和抗原决定簇反应而破坏了其结合部位，用柠檬酸盐缓冲液在中高火加热的过程中可以把这些基团破坏，修复抗原），注意柠檬酸盐缓冲液要加满，防止因为挥发而使得组织暴露在空气中干掉。在室温自然冷却。用ddH2O清洗15遍。
5. 孵育一抗：配制好一抗后放在4℃冰箱中备用，把片子摆放在孵育盒中，用PBS洗3遍（注意胃癌组织较大易掉片，不要对着组织清洗），甩干水分，用油性笔花圈（注意圈不要离组织太近）。每个片子加100ul抗体孵育过夜。（注意：别孵反了。）
6. 孵育二抗：（提前和陈老师打好招呼要在大概40min后要显色）第二天过来取出孵育盒在室温中放置10min，用PBS清洗三遍甩干片子孵育二抗37℃40min后，用PBS清洗3遍。
7. DAB显色：临用前配置好DAB显色剂，1mlddH2O中分别低价1d试剂1、2、3。显色时间要把握好。
8. 苏木素染色：用苏木素核染1min（核染之前先破坏苏木素表面的氧化膜）洗2遍；1%HCl3s,洗2遍；LiCO3浸3s,洗2遍。自来水冲洗15min.
9. 脱水：依次85%酒精5min,95% 酒精5min，100%酒精5min，100%酒精
5min，二甲苯Ⅰ10min,二甲苯Ⅱ10min。在工作台中风干。
10. 封片：用中性树胶封片。（注意：别封反了）
用体式显微镜观察染色情况，采用德国半定量评分方法从染色的范围和深度两个方面， 对染色情况做德国半定量分析评分，统计好数据在excel表中并做好统计图。将其中1-2个典型的样本保存图片。
实验中注意事项：（1）过缸过程和DAB显色比较毒，所以注意戴手套操作。（2）实验要设置阴性试剂对照，阴性组织对照，阳性组织对照。
