提 高 性 实 验 报 告
实验课题：
叶绿素a、叶绿素b含量测定
（实验类型：□综合性 □应用性） √□设计性
专业名称： 实验课程： 实验时间：
姓名： XXX 班级： XXXX 学号：XXXXXXXX
植物科学与技术
植物生理学
2016．10.21
生物学实验教学示范中心
实验报告正文
实验课题名称 叶绿素a、叶绿素b含量测定 文献综述（列出参考文献） 植物 95%以上的干物质是由光合作用提供的 ,而叶片则是光合作用的主要器官 ,叶片中的叶绿体是光合作用最主要的细胞器。 高等植物在光合反应中吸收光能的主要色素为叶绿素 ,其含有的叶绿素 a和叶绿素 b能将光能转化为化学能 ,形成有机物质。 因此 ,叶片中叶绿素含量的高低是反映植物叶片光合能力的一个重要指标。[1] 测定叶绿素含量的方法有离体法(如分光光度 法)和活体法(如叶绿素仪法)。分光光度法具有准确度高的特点, 是叶绿素含量测定过程中应用最广泛的方法。叶绿素的含量变化与植物生长发育状况以及 环境变化密切相关。[2]据查，水稻比玉米叶绿素含量高，而水稻和玉米又比喜荫植物吉祥草高。[2] 而不同发育期的植物叶绿素的含量也会有所不同。[3] [1] 牟晓玲. 对不同植物叶绿素 a和叶绿素 b含量比的测定.[J].甘肃农业科技.2004(11):55-56 [2] 袁方,李鑫,余君萍,王学奎,徐久玮,张立新. 分光光度法测定叶绿素含量及其比值问题的探讨.[J].植物生理学通讯.2009,45(1):63-66 [3] 陈小龙 陈 灿,周 莉. 水稻不同生育期叶绿素含量的测定及其相关性分析.[J].现代农业科技.2010（17）:42-44 实验目的和要求 熟悉在未经分离的叶绿素溶液中测定叶绿素a和叶绿素b的方法及其计算 实验条件（包括实验材料、药品、仪器设备等） 1、 实验仪器:分光光度计、离心机、天平、剪刀、研钵、漏斗、移液管 2、 实验药品：丙酮、碳酸钙 3、 实验材料：植物叶片：①陆生花生：水生花生 ②小叶黄杨新叶：小叶黄杨老叶 实验原理与方法 • 叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b，二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定在663nm和5nm（分别是叶绿素a和叶绿素b在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和叶绿素b的浓度。 • A663=82.04ρa+9.27ρb （1） • A5=16.75ρa+45.60ρb （2） • 公式中ρa为叶绿素a的浓度，ρb为叶绿素b浓度（单位为g/L），82.04和9.27 分别是叶绿素a和叶绿素b在663nm下的比吸收系数（浓度为1g/L，光路宽度为1cm时的吸光度值）；16.75和45.60分别是叶绿素a和叶绿素b在5nm下的比吸收系数。即混合液在某一波长下的光吸收等于各组分在此波长下的光吸收之和。 将上式整理，可以得到下式： • ρa=0.0127A663-0.00269A5 （3） • ρb=0.0229A5-0.00468A663 （4） 将叶绿素的浓度改为mg/L，则上式变为： • ρa=12.7A663-2.69A5 （5） • ρb=22.9A5-4.68A663 （6） • ρT=ρa+ρb=8.02A663+20.21A5 （7） • ρT为叶绿素的总浓度 实验方案或实验步骤设计结果与分析 1、色素的提取 取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，称取0.5g放入研钵中加纯丙酮5ml，少许CaCO3和石英砂，研磨成匀浆，再加80%丙酮5ml，将匀浆转入离心管，并用适量80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心5min后弃沉淀，上清液用80%丙酮定容至20ml。 2、测定OD值 取上述色素提取液1ml，加80%丙酮4ml稀释后转入比色杯中，以80%丙酮为对照，分别测定663nm、5nm处的OD值。 4、 计算 按式（5）、（6）、（7）分别计算色素提取液中叶绿素、叶绿素及叶绿素的浓度。再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素的含量。 实验数据及数据处理 水花生（陆生） 水花生（水生） 663nm 0.245 0.377 5nm 663nm 5nm 0.098 0.132 珊瑚树 （新叶） 0.345 0.132 珊瑚树 （成熟叶） 0.490 0.201 实验结果与分析 Ρa(mg/L) ρb(mg/L) ρT(mg/L) 叶绿素a含量(mg/g鲜重) 叶绿素b含量(mg/g鲜重) 叶绿素总含量(mg/g鲜重) 水花生（陆生） 2.848 1.098 3.946 0.1424 0.0549 0.1973 水花生（水生） 4.433 1.258 5.691 0.22165 0.0629 0.85065 Ρa(mg/L) ρb(mg/L) ρT(mg/L) 叶绿素a含量(mg/g鲜重) 叶绿素b含量(mg/g鲜重) 叶绿素总含量(mg/g鲜重) 分析 水生植物比陆生植物叶绿素含量高 成熟的叶子比幼嫩的叶子叶绿素含量高 植物叶绿素a比叶绿素b含量高 珊瑚树（新叶） 4.026 1.408 5.434 0.2013 0.0704 0.2717 珊瑚树（成熟叶） 5.682 2.310 7.992 0.2841 0.1155 0.3996 实验小结（实验存在的问题讨论，分析实验成败的原因，提出适当的建议，实验的收获和体会等） 1、 学会自己设计组合来进行实验研究 2、 实验时样品要标清楚，不能混淆 3、 学会如何使用分光光度计 教师评语 实验成绩 指导教师签字： 年 月 日
