单核细胞与淋巴细胞比值联合SAT-TB法对于涂阴肺结核的鉴别诊断价值

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·论著·

单核细胞与淋巴细胞比值联合SAT-TB法对于涂阴肺结核的

鉴别诊断价值

翟荣荣

【摘要】 目的 探讨单核/淋巴细胞比值（monocyte-to-lymphocyte ratio, MLR）联合实时荧光恒温扩增检测技术（simultaneous isothermal Amplification and Testing，SAT）对涂阴肺结核的预测及其对非结核性肺部疾患的鉴别诊断价值。方法 选择来本院就诊的120例肺部疾病患者为研究对象，65例涂阴肺结核患者为实验组，55例非结核病患者为对照组，同时进行全血细胞计数和TB RNA检测，采用受试者工作曲线ROC对MLR截断值进行分析，计算两种方法及联合检测对于涂阴肺结核的检出灵敏度、特异度。结果 与非结核病患者相比，涂阴肺结核患者外周血单核细胞数量、MLR值及

TB-RNA阳性率均明显升高（P<0.001）。受试者工作曲线（ROC）分析显示，MLR预测涂阴肺结核的灵敏度和特异度分

DOI：10.3969/j.issn.1671-2587.2019.03.020

作者单位: 237005 安徽医科大学附属六安市人民医院医学检验科

作者简介：翟荣荣（1984–），女，安徽肥西人，主管检验师，硕士，主要从事为免疫及分子生物学检验工作，（E-mail）zhairongrong0324@163.com。

神经重构和损伤后的神经再生，还能保护脑细胞、改善神经传导并促进脑电活动，从而达到恢复神经支配功能的目的，所以在HIE患儿的常规神经营养治疗基础上加用单唾液酸四已糖神经节苷脂，可以提高患儿的治疗效果，不仅可以有效促进HIE患儿受损神经元修复，也能提高患儿的日常生活质量。

综上所述，强化神经营养方案治疗康复期的缺氧缺血性脑病患儿不仅能提高NGF水平，降低MBP和

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（收稿日期：2018-03-14）

（本文编辑：张媛媛）

·298·

J Clin Transfus Lab Med, June.2019.Vol 21,No.3 别为61.5%、67.3%。与SAT-TB法联合应用的灵敏度、特异性、阴性预测值、阳性预测值分别为76.9%，67.3%，71.2%和73.5%，灵敏度明显高于MLR和SAT-TB法的单独应用，差异有统计学意义（P=0.043；P<0.001）。结论 MLR联合SAT-TB法对于涂阴肺结核有较好的预测和鉴别诊断价值，对控制结核病的传播具有一定意义。

【关键词】 涂阴肺结核 恒温扩增 单核/淋巴细胞比值 鉴别诊断

【中图分类号】 R521 R446.11 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-2587（2019）03-0297-05

The Value of Monocyte-to-lymphocyte Ratio Combined with Simultaneous Amplification and Testing for TB-RNA （SAT-TB） in Differential Diagnosis of Smear-Negative Pulmonary Tuberculosis ZHAI Rong-rong.Clinical Laboratory Center, Lu'an Hospital of Anhui Medical University, Lu'an, Anhui 237005

【Abstract】 Objective To investigate the predictive value of monocyte-to-lymphocyte ratio （MLR） combined with TB-RNA in smear-negative tuberculosis for differential diagnosis of pulmonary diseases. Methods One hundred and twenty patients with pulmonary diseases in the hospital were examined for blood cell counts and TB-RNA, among them included 65 smear-negative cases of pulmonary tuberculosis （experimental group） and 55 cases of non-tuberculosis （the control group） . The cut-off value of MLR was analyzed by ROC curve, and the sensitivity and specificity of the two markers and the combined detection for smear-negative pulmonary tuberculosis were calculated. Results Compared with non-tuberculosis patients, the number of peripheral monocytes, MLR and positive rate of TB-RNA in the sputum samples of smear-negative pulmonary tuberculosis patients were significantly increased （P<0.001）. The sensitivity and specificity of MLR in predicting smear-negative pulmonary tuberculosis were 61.5% and 67.3%, respectively. When combined with SAT-TB, the sensitivity, specificity, NPV and PPV were 76.9%, 67.3%, 71.2% and 73.5%, respectively. The combined sensitivity was notably higher than that of MLR and SAT-TB alone （P=0.043; P<0.001）. Conclusion The MLR combined with SAT-TB has a promising

predictive and differential diagnostic significance in smear-negative pulmonary tuberculosis, indicating a potential value in

controlling the spread of tuberculosis.

【Key words】 Smear-negative pulmonary tuberculosis Isothermal amplification Monocyte-to-lymphocyte ratio Differential diagnosis

肺结核是全球最常见的传染病之一，由结核分枝杆菌引起，严重危害人们的生命健康。根据世界卫生组织（WHO）于2013年公布的结核病控制报告，每年新增250万涂阳肺结核和190万涂阴肺结核，涂阴肺结核占新发肺结核患者的43%。2015年我国的流行病学抽样调查中发现涂阴肺结核患者占新发肺结核患者的66.43%，在活动性肺结核患者中，涂阴患者是涂阳患者的5.9倍多[1]。由于缺乏细菌学诊断证据、临床症状不典型，诊断具有一定困难，使得涂阴肺结核成为传染源，及时对其做出准确诊断，有利于帮助患者恢复健康，亦可控制结核病的传播。

单核细胞和淋巴细胞在诱导免疫应答过程中发挥重要作用，外周血单核/淋巴细胞比值（monocyte-核的相关性。实时荧光核酸恒温扩增（simultaneous

isothermal Amplification and Testing，SAT）作为新

兴技术，已逐渐应用于肺结核的快速检测，因其灵敏度高，对于活动性肺结核的TB检出率优于痰涂片法；特异性好（仅针对结核分枝杆菌RNA），对于活动性肺结核与其他肺部疾患具有较好的鉴别诊断价值。但SAT-TB对于涂阴肺结核的诊断价值研究极少，且检测标本为支气管肺泡灌洗液[10,11]，纤支镜有较多禁忌证，不利于部分患者取材，本文通过收集涂阴肺结核患者入院未经治疗时的痰标本进行SAT-TB检测，分析其对于涂阴肺结核的诊断和鉴别诊断价值，同时采集涂阴肺结核患者未经治疗时的外周血标本分析MLR，利用受试者工作曲线观察其对于涂阴肺结核的识别能力，并观察两者联合应用是否可提高涂阴肺结核的检出率。

资料与方法

1 研究对象 将2017年9月~2018年9月于本院就诊的120例肺部疾病患者作为研究对象，65例为涂阴肺结核患者，作为观察组，其中男性48例，女性17例，年龄16~85岁。纳入标准：符合中国结核病防治规划实施工作指南（2008年版）对于涂阴肺结核的诊断要

to-lymphocyte ratio, MLR）可反映个体对病原体感染的免疫状态。近年来研究发现，MLR对于肺癌[2]、原

发性肝癌[3]、卵巢恶性肿瘤[4]、多发性骨髓瘤[5]和胰腺癌[6]等疾病的预后具有评判价值。一些研究指出，外周血MLR与罹患结核病风险[7]及抗结核治疗的预后密切相关[8]，是活动性肺结核的重要预测因子[9]。但实验方法学中结核病评判仅以结核菌素试验为标准或观察对象均为涂阳肺结核，并未分析MLR与涂阴肺结

临床输血与检验 2019年6月第21卷第3期　

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求，有肺结核症状、胸部X线或CT扫描呈现典型的结核表现、抗结核药物治疗有良好反应等，所有患者既往均无抗结核治疗史。对照组患者为55例，其中男性32例，女性23例，年龄17~88岁，纳入标准：排除活动性肺结核和陈旧性肺结核的其他肺部疾病患者，包括细菌性肺炎、慢性阻塞性肺部疾患和肺炎等。所有患者均进行了痰液结核分支杆菌RNA检测和外周血血细胞分析。2 方法

2.1 痰标本的采集和处理：患者以清水漱口后，用力咳出痰液标本置于痰杯中，加入1~2倍体积的4%NaOH，漩涡震荡，若痰液浓稠，可酌情增加NaOH用量，室温静置15~20 min（不可超过20

检测。将以上处理过的样本再经超声（功率300 W）处理15 min（处理过程中绝不可以打开离心管盖），由于超声处理后管壁外面有较多水渍，可以置于离心机中瞬时离心，之后取出2 µL加入含30 µL扩增检测液的PCR反应管中，立即置入干热恒温器中，60℃、10 min，取出再置入恒温混匀仪中，42℃、5 min，然后加入10 µL预热的酶液，混匀后立即转入PCR仪（罗氏Cobas z480，瑞士）中进行荧光检测（FAM通道，42℃，40个循环）。

3 血标本采集及全血细胞计数 患者入院治疗前以

EDTA-K2抗凝管采集空腹外周血样本2 mL，使用血细胞分析仪（Sysmex XE-2100，日本）进行全血细

胞计数。

4 统计学处理 应用SPSS19.0软件，年龄比较采用样本t检验，性别构成比、灵敏度及特异性的比较采用Fisher确切概率法，淋巴细胞、单核细胞及MLR等计量资料呈偏态分布，采用Mann-Whitney U检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

结 果

min），使其充分液化。混匀后，取液化好的痰液1 mL于1.5 mL离心管中，13 000 r/min离心5 min，弃去上清，加入 1mL生理盐水洗涤1次，13 000 r/min离心5 min，弃上清，加入50 µL稀释液（含核糖核酸

酶抑制剂）重悬，该标本即为待测样本。

2.2 RNA提取及恒温扩增：使用结核分支杆菌核酸检测试剂盒（RNA恒温扩增）（上海仁度，中国）进行

表1 两组患者年龄分布比较

组别

对照组涂阴肺结核组

例数5565

年龄（岁） 最小值（岁） 最大值（岁） 60.9±17.854.9±20.2

1716

8885

F值1.547P值0.091

表2 两组患者性别构成比较

组别对照组涂阴肺结核组合计

性别（例数）男324880

女231740

合计

1 涂阴肺结核组与对照组患者的基本资料比较，年

P值

0.082

龄及性别构成比的差异均无统计学意义（P=0.091；

55 65

120

P=0.082），见表1、2。

2 两组患者单核淋巴细胞比值（MLR）检测结果分析 涂阴肺结核组单核细胞数明显高于对照组

表3 两组患者外周血淋巴细胞、单核细胞及单核/淋巴细胞比值的比较

组别

对照组涂阴肺结核组

淋巴细胞（×109/L）中位数（Q1，Q3）P值1.2（0.9，1.6）1.1（0.8，1.6）

0.546

单核细胞（×109/L）

中位数 （Q1，Q3）P值0.4（0.34，0.61）0.57（0.46，0.70）

单核/淋巴细胞比值

中位数 （Q1，Q3）0.311（0.235，0.56）0.52（0.325，0.83）

P值

<0.001< 0.001

（P<0.001），而两组患者淋巴细胞数的差异无统计学意义（P=0.546）。与对照组相比，涂阴肺结核组

61.5%，特异性为67.3%。见图1。

4 两组患者SAT-TB检测结果分析 55例非结核病患者组TB-RNA均为阴性，65例涂阴肺结核组中26例为阳性，阳性率为40%。涂阴肺结核组TB-RNA阳性率明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.001），见表4。

5 MLR联合SAT-TB对于涂阴肺结核的诊断价值 65例涂阴肺结核中26例为TB-RNA阳性，其余均为

MLR明显升高，差异有统计学意义（P<0.001），见

表3。

3 MLR鉴别涂阴肺结核与非结核病的ROC曲线分析 应用受试者工作曲线显示，MLR用于预测涂阴肺结核的ROC曲线下面积AUC=0.702，MLR鉴别诊断的最佳临界值为0.4155，诊断涂阴肺结核的灵敏度为

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J Clin Transfus Lab Med, June.2019.Vol 21,No.3 阴性，SAT-TB法诊断灵敏度为40%；55例非结核病患者中TB-RNA均为阴性，SAT-TB法诊断特异性为100%。MLR联合SAT-TB法以MLR>0.415 5和（或）TB-RNA阳性预测为涂阴肺结核，以

图1 MLR预测涂阴肺结核的ROC曲线

MLR<0.4155且TB-RNA阴性预测为非结核病，涂阴肺结核的阳性率为76.9%（50/65），明显高于非结核病组（P<0.001）。联合诊断的灵敏度为76.9%（50/65），特异性为67.3%（37/55），阴性预测值为71.2%（37/52），阳性预测值为73.5%（50/68）。见表5。

MLR对于涂阴肺结核的检测灵敏度高于SAT-TB法（P=0.022），而特异性低于SAT-TB法

表4 两组患者SAT法TB-RNA检出率比较

组别

非结核病组涂阴肺结核组

TB-RNA（n，%）

阳性0（0）

阴性

合计5565

P值<0.001

26（40.0）

55（100.0）39（60.0）

表5 两组患者MLR联合SAT法检测结果比较

组别

非结核病组涂阴肺结核组合计

联合阳性

185068

联合阴性

371552

合计

P值<0.001

55 65

120

注：联合阴性为MLR<0.415 5且TB-RNA阴性；联合阳性为MLR>0.415 5和（或）TB-RNA阳性

（P<0.001），二者联合灵敏度明显高于单独MLR（P=0.043）和单独SAT-TB法（P<0.001），特异性低于SAT-TB法（P<0.001），与单独MLR的差异无统计学意义（P=1.000）。

讨 论

涂阴肺结核仍属于活动性肺结核，具有传染性，但痰标本抗酸染色不能检出抗酸杆菌，胸部X线检查病变表现不典型，易漏诊，也易与其他肺部疾患混淆，因此，提高对涂阴肺结核的检出率极为重要。实时荧光核酸恒温扩增检测技术（SAT）将核酸恒温扩增技术和实时荧光PCR技术相结合，具有超高的检测效率，已逐渐应用于肺结核的诊断领域[12-14]。有文献报道，SAT-TB对于肺结核的诊断敏感度高达84%

[15]

单核细胞是先天免疫应答的重要组成部分，在外周血中循环数天后即迁移到组织中分化为巨噬细胞，通过将抗原呈递给淋巴细胞而参与适应性免疫应答。因此，单核和淋巴细胞数量的改变可能会影响被感染个体的免疫反应性。单核巨噬细胞系统可吞噬结核分支杆菌，起到清除病原体的作用，但研究发现[16]结核患者体内巨噬细胞产生的肿瘤坏死因子（TNF-α）可促进结核分枝杆菌在细胞内的繁殖。动物实验表明，两种不同作用的发挥取决于巨噬细胞的两种极化形式（M1和M2），当巨噬细胞朝向M2型极化时，可充当结核分枝杆菌的庇护所，帮助其逃脱免疫系统的攻击[17]。有文献报道[18，19]，活动性肺结核患者体内单核细胞数量显著高于细菌感染者和健康人群。本研究结果显示涂阴肺结核患者体内单核细胞数量也明显高于其他非结核肺部疾病患者。然而，外周血增多的单核细胞对于结核分枝杆菌有何影响尚依赖于更进一步的研究。本次研究中未发现涂阴肺结核患者淋巴细胞数量的改变，与伏开心等[18]对于活动性肺结核的研究结论一致，但并未对淋巴细胞亚群及

，对涂阴肺结核的灵敏度为53.3%

[10]

。本次研

究中SAT-TB在涂阴肺结核组的阳性率为40%，可能是由于上述报道的检测样本为支气管肺泡灌洗液，样本合格率高于本文中的检测样本痰液。标本类型、取材正确与否及间歇性排菌等原因，导致SAT-TB对于涂阴肺结核的检出率仍不够高。

T细胞亚群进行分析，后续试验将进行这方面研究。

临床输血与检验 2019年6月第21卷第3期　

MLR可在HIV感染人群的抗病毒治疗过程中预测结核病的发病率[7],也可用于活动性肺结核的预测[9]。本研究发现，涂阴肺结核患者外周血MLR显著高于非结核病患者，ROC曲线下面积（AUC）>0.7，诊断具有一定的准确性，与SAT-TB法联合应用时可获得更高的

鉴别诊断灵敏度，可作为涂阴肺结核与其他非结核性肺部疾患鉴别时的辅助诊断指标。

综上所述，SAT-TB法操作简单，检测耗时短，外周血单核/淋巴细胞比值检测成本低，易获取，二者联合应用有利于涂阴肺结核的检出，为结核病的治疗提供依据，从而有利于控制结核病的传播。

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（收稿日期：2018-10-15）

（本文编辑：张媛媛）