ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＦｏｏｄＩｎｄｕｓｔｒｙ
研究与探讨
豆豉纤溶酶分离及其特性的研究牟光庆１，２，贾楠２，霍贵成１，＊
（１．东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨１５００３０；
２．大连轻工业学院生物与食品工程学院，辽宁大连１１６０３４）
摘要：采用硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析，从豆
豉粗酶液中提取纤溶酶。分离后的纤溶酶样品在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳中有一个活性峰呈单一条带，分子量为３５ｋＤａ，活性回收率为２２．５％，纯化倍数为１１．７；另一活性峰呈三条带，需进一步分离。特性研究表明：在ｐＨ７．０左右，温度４０℃时，酶活力最高；该纤溶酶不耐热，其纤溶活性可被Ｍｎ２＋、明胶对酶Ｍｇ２＋以及Ｎａ２ＳＯ３激活，Ｃａ２＋以及乙醇、
活力具有较强的抑制作用；ＮａＣｌ浓度低于１０％，酶活力能够基本保持稳定。关键词：豆豉纤溶酶，分离，稳定特性
性进行了研究。１材料与方法
１．１材料与仪器
豆豉纤溶酶产生菌ＳＹ－３本实验室筛选保存；ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００Ｓｉｇｍａ公司；牛纤维蛋白原、凝血酶、尿激酶均购自中国药品生物制品检定所。高速冷冻离心机，７２２型光栅分光光度计，Ｅｙｅｌａ自动馏分收集器，稳压稳流电泳仪，紫外分光光度计。Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅｗａｓｓｅｐａｒａｔｅｄｂｙ（ＮＨ４）２ＳＯ４
ｆｒａｃｔｉｏｎａｌｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎａｎｄＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００ｇｅｌｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｆｒｏｍｃｒｕｄｅｅｎｚｙｍｅｌｉｑｕｉｄｏｆＤｏｕｃｈｉ．Ｔｈｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｐｅａｋ２ｇｉｖｅａｓｉｎｇｌｅｂａｎｄｏｎＳＤＳ－ＰＡＧＥ，ｉｔｓｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｉｓ３５ｋＤａ，ｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｏｆａｃｔｉｖｉｔｙｉｓ２２．５％ａｎｄｐｕｒｉｆｙｍｕｌｔｉｐｌｅｉｓ１１．７．Ａｎｏｔｈｅｒａｃｔｉｖｅｐｅａｋｈａｓｔｈｒｅｅｂａｎｄｓａｎｄｎｅｅｄｔｏｂｅｓｅｐａｒａｔｅｄｃｏｎｔｉｎｕｅｄ．ＩｎｓｔｕｄｙｏｆｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＤｏｕｃｈｉｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅ，ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｐＨ７．０ａｎｄ４０℃，ｔｈｅｈｅａｔｓｔａｂｉｌｉｔｙｉｓｎｏｔｗｅｌｌ；ｔｈｅｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｉｓａｃｔｉｖａｔｅｄｂｙＭｎ２＋、Ｍｇ２＋ａｎｄＮａ２ＳＯ３ｗｈｉｌｅｉｎｈｉｂｉｔｅｄ
ａｌｃｏｈｏｌａｎｄｇｅｌａｔｉｎ．ＷｈｅｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｂｙＣａ２＋、
ＮａＣｌｉｓｌｏｗｅｒｔｈａｎ１０％，ｔｈｅｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｃａｎｋｅｅｐｓｔａｂｉｌｉｔｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｄｏｕｃｈｉｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ；
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ中图分类号：ＴＳ２０１．２＋５文献标识码：Ａ文章编号：１００２－０３０６（２００７）０７－００９０－０４
１．２实验方法
１．２．１豆豉纤溶酶的分离１．２．１．１酶活力的测定根据改进的Ａｓｔｒｕｐ方法［３］，将尿激酶标准品（２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０ＩＵ／ｍＬ）各１０!Ｌ点样于新配制的纤维蛋白平板上，静置１０ｍｉｎ，３７℃恒温培养１８ｈ，取出测定溶圈垂直直径，计算溶圈面积。以标准酶活力对数为横坐标，以溶圈面积对数为纵坐标，绘制尿激酶标准曲线。吸取粗酶液１０!Ｌ，点样于纤维蛋白平板上，静测定透明圈的垂直直置１０ｍｉｎ，３７℃恒温培养１８ｈ，径。根据标准曲线，计算纤溶酶的活力。１．２．１．２蛋白质的测定Ｆｏｌｉｎ－酚法［１］。１．２．１．３ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析分离将粗提所得纤溶酶沉淀溶于一定量５０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（ｐＨ７．４）中，充分透析（分子量小于１００００Ｄａ），即得粗酶液。将已经溶胀２ｄ的ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００装入层析柱（２．５ｃｍ×８０ｃｍ）中，用５０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（ｐＨ７．４）充分平衡，粗酶样品上样量５ｍＬ，用５０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（ｐＨ７．４）洗脱，流速为０．２ｍＬ／ｍｉｎ，以每管５ｍＬ进行分部收集，紫外分光光度计２８０ｎｍ下检测蛋白吸收峰，用纤维蛋白平板法检测蛋白吸收峰是否为酶活力峰，收集含有高纤溶活性的组分。心脑血管疾病正日益严重危害着人们的健康，已成为人类死亡的主要原因之一。从传统发酵食品豆豉中分离纯化出一种具有较高纤溶活性的酶———豆豉纤溶酶，不仅溶栓能力强，而且无毒副作用［１］，不引起内出血，半衰期长［２］。无论作为抗血栓药物还是预防血栓病的保健食品，豆豉纤溶酶都具有十分重要的开发价值。本论文就实验室筛选获得的高产豆豉纤溶酶ＳＹ－３发酵豆豉所产溶栓酶分离及稳定特１．２．１．４ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳的纯度分析及分子量测定［４］分离胶浓度１２％，浓缩胶浓度５％，胶体积考马斯亮蓝法显色蛋白条带，比１０ｃｍ×１０ｃｍ×０．０７ｃｍ。较各步分离效果。以分离纯化的样品进行电泳，与收稿日期：２００６－１２－０４＊通讯联系人
作者简介：牟光庆（１９６７－），男，教授，博士研究生，研究方向：功能性
乳制品及食品发酵技术。
基金项目：辽宁省教育厅项目（２００４Ｄ２３２）。
Ｍａｒｋ标准蛋白质分子量比较，测定豆豉纤溶酶的分９０２００７年第０７期
研究与探讨
子量。Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．０７，２００７样在纤维蛋白平板上，按溶圈直径大小依次为１００、加盖后３７℃保温１８ｈ，结果如图５０、２５、１２．５、５ＩＵ／ｍＬ。１．２．２豆豉纤溶酶特性的研究１．２．２．１粗酶液制备［５］ＳＹ－３发酵液经冷冻离心（１００００ｒ／ｍｉｎ、１０ｍｉｎ），弃沉淀，取上清。向上清液中缓慢加入硫酸铵使饱和度达到２０％，４℃静置过夜，冷冻离心（１００００ｒ／ｍｉｎ、１０ｍｉｎ），弃沉淀，除去杂蛋白；取上清缓慢加入硫酸铵使饱和度达到６０％，４℃静置过夜，冷冻离心（１００００ｒ／ｍｉｎ、１０ｍｉｎ），弃上清液，取沉淀溶于一定量的缓冲液，即得粗酶液。１所示，制成标准曲线见图２。１．２．２．２酶活力的定性比较方法［６］根据牛奶平板法的原理，用分光光度法对酶的活性进行定性比较。用ｐＨ７．４的磷酸缓冲液配制１％脱脂奶粉，煮沸后过滤，取滤液４ｍＬ，加入１ｍＬ粗酶液于３７℃水浴中保温图１尿激酶在纤维平板上的水解圈
ＯＤ４１０，根据△ＯＤ４１０定性比较酶活力大小。△ＯＤ４１０＝ＯＤ１－ＯＤ２式中：ＯＤ１———刚加入粗酶液时的吸光值；——保温５ｈ后的吸光值。ＯＤ２—水解圈面积的对数５ｈ，分别测定刚加入酶液及保温５ｈ后体系的吸光值２．５２．３２．１１．９１．７１．５ｙ＝０．４３９８ｘ＋１．５１６１Ｒ２＝０．９９５２１．２．２．３ｐＨ对酶活力的影响将离心所得粗酶沉淀分别用等量ｐＨ５．０乙酸－乙酸钠缓冲液，ｐＨ６．０、７．０、０．２０．５０．８１．１１．４酶浓度的对数
１．７２２．３８．０磷酸氢二钠－磷酸二氢钠缓冲液，ｐＨ９．０Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液，ｐＨ１０．０、１１．０碳酸氢钠－氢氧化钠缓冲液溶解，３７℃，分别与底物作用５ｈ。采用比色法定性比较图２尿激酶活力标准曲线
２．１．２ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析图３可知，在洗脱过程有２个紫外吸收峰，对这２个吸收峰进行纤维蛋白平板检测，均可以明显检测到豆豉纤溶酶活力，故峰１和峰２均为豆豉纤溶酶的所在部分。ｐＨ对酶活力的影响。１．２．２．４温度对酶活力的影响将粗酶液与底物混合，分别在２５、３０、３７、４２、５０、６０、７０℃下反应５ｈ，采用比色法定性比较不同温度对酶活力的影响。１．２．２．５热稳定性实验将等量的粗酶液与底物混合，分别置于３７、５０、６０、７０℃水浴中保温１５、３０、４５、６０、７５、９０ｍｉｎ，采用比色法比较９０ｍｉｎ内，不同温度下酶活力的变化情况。０．５０．４０．３０．２０．１０１２ＯＤ２８００１０２０３０４０管数
５０６０７０８０１．２．２．６金属离子对酶活力的影响配制５ｍｍｏｌ／ＬＣａ２＋、Ｃｕ２＋、Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋、Ｚｎ２＋、Ａｌ３＋溶液，用等量的上述溶液分别溶解等量的粗酶沉淀，３７℃保温１８ｈ，采用比色法比较相同浓度金属离子对酶活力的影响。图３ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析紫外吸收峰
２．１．３ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳纯度鉴定活性洗脱峰浓缩后，进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，如图４所示。粗酶液经过１．２．２．７化学物质对豆豉纤溶酶活性的影响配制１％乙醇、甘油、蛋白胨、明胶、海藻酸钠溶ＮａＣｌ、Ｎａ２ＳＯ３、液，用等量的上述溶液分别溶解等量的粗酶沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析，所得到的活性吸收峰经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测，峰２呈单一条带，即为９７．２ｋＤａ６６．４ｋＤａ
３７℃保温１８ｈ，采用纤维蛋白平板法比较相同浓度的不同化学物质对酶活力的影响。１．２．２．８ＮａＣｌ浓度对酶活力的影响配制１％、２％、５％、８％、１０％、１２％、１５％、１８％、２０％的ＮａＣｌ溶液，用等量的上述溶液分别溶解等量的粗酶沉淀，３７℃保温４４．３ｋＤａ
２９．０ｋＤａ
３５ｋＤａ３０ｋＤａ２３ｋＤａ
１８ｈ，采用比色法比较ＮａＣｌ浓度对酶活力的影响。２结果与讨论
２．１豆豉纤溶酶分离结果
２．１．１尿激酶标准曲线将尿激酶标准品用缓冲液依次稀释为１００、５０、２５、１２．５、５ＩＵ／ｍＬ，分别取１０!Ｌ点２０．１ｋＤａ１４．３ｋＤａ
ＭＡＲＫ峰１峰２
图４豆豉纤溶酶电泳图
２００７年第０７期
９１ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＦｏｏｄＩｎｄｕｓｔｒｙ
表１豆豉纤溶酶纯化结果
步骤粗提液硫酸铵盐析
总蛋白（ｍｇ）
总酶活（ＩＵ）
比活力（ＩＵ／ｍｇ）
回收率（％）
研究与探讨
纯化倍数
ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００（２）
６．７４２００．５４６８０．１２９３１０６８８３８２４０１５８．４１５３２．６１８５６．１
纤溶酶不耐高温。１００７８．５２２．５１９．７１１．７
单一组分，与标准蛋白分子量比较，所得活性蛋白峰的分子量约为３５ｋＤａ，即豆豉纤溶酶分子量为２．２．３热稳定性实验豆豉纤溶酶在不同温度下保温不同时间，酶活力稳定性的变化情况如图７所示。由图７可知，３７℃时，９０ｍｉｎ内酶活力几乎保持稳定；３５ｋＤａ；而峰１呈三条带，表明经过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００纯化后不能得到单一组分，因而需进一步分离纯化。２．１．４豆豉纤溶酶分离结果分离的整个过程中，对每个步骤进行评价，即对每一步收集的酶液进行活纯化倍数和回收率，见表１。力测定，并计算比活力、通过硫酸铵盐析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析后，样品经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳纯度鉴定：峰２为单一条带，酶的回收率为２２．５％，纯化倍数为１１．７，比活力为１８５６ＩＵ／ｍｇ。５０℃时，４５ｍｉｎ后酶活力开始迅速下降，７５ｍｉｎ后趋于平衡；６０℃时，６０ｍｉｎ后酶活力迅速下降，９０ｍｉｎ时活力几乎完全丧失；７０℃时，１５ｍｉｎ后酶活力急剧下降，因此，该酶的耐热性较６０ｍｉｎ左右时，活力完全丧失。差。２．２豆豉纤溶酶的特性
２．２．１ｐＨ对酶活力的影响不同的ｐＨ缓冲体系中，豆豉纤溶酶活力的变化情况如图５所示。由图５可知，在ｐＨ６．０～８．０时，酶活力相对稳定；在ｐＨ７．０时，酶活力达到最高；ｐＨ低于７．０时，酶活力随着ｐＨ的增大而提高；在ｐＨ５．０以下酶活力迅速丧失；高于０．１２０．１０．０８０．０６０．０４０．０２０３７℃５０℃６０℃７０℃
ＯＤ４１００２０４０６０时间（ｍｉｎ）
８０１００图７热稳定性实验结果
７．０时，酶活力随着ｐＨ的增大而降低；当ｐＨ达到１１时，酶活力完全丧失。２．２．４金属离子对酶活力的影响选择常见的６种金属阳离子，考察它们对豆豉纤溶酶活力稳定性的影响情况，如图８所示。由图８可知，Ｍｎ２＋、Ｍｇ２＋对豆豉纤溶酶有很好的稳定作用，是较好的激活剂；Ｚｎ２＋、０．５０．４０．３ＯＤ４１０Ａｌ３＋、Ｃｕ２＋对豆豉纤溶酶有不同程度的抑制作用，且抑制作用Ｚｎ２＋＜Ａｌ３＋＜Ｃｕ２＋；Ｃａ２＋使豆豉纤溶酶酶活力完全丧失。０．２０．１００．３０．２５０．２－０．１４５６７８ｐＨ９１０１１１２ＯＤ４１０图５ｐＨ对酶活力的影响
０．１５０．１０．０５０对照Ｍｎ２＋Ｚｎ２＋Ｃｕ２＋Ａｌ３＋
２．２．２温度对酶活力的影响温度对酶活力的影响如图６所示。由图６可知，４０℃时酶活力达到最高；当温度低于４０℃时，酶活力受到抑制，因此活力较低；当温度超过５０℃时，因为蛋白变性酶活力迅速下降；当温度达到７０℃时，酶活力几乎完全丧失。可见，豆豉Ｃａ２＋Ｍｇ２＋
金属离子
图８金属离子对酶活力的影响
０．２５０．２ＯＤ４１０２．２．５化学物质对酶活力的影响选择７种常用作冻干保护剂的化学物质，考察它们对豆豉纤溶酶的影响情况，如图９所示。由图９可知，Ｎａ２ＳＯ３对酶具有较强的激活作用；蛋白胨对酶活力的影响不显著；０．１５０．１０．０５０２０３０４０５０６０温度（℃）
７０８０ＮａＣｌ、甘油和海藻酸钠对酶活力稍有抑制作用；乙醇、明胶具有较强的抑制作用。因此，在豆豉纤溶酶的冻干过程中，应尽量避免采用对豆豉纤溶酶活性有抑制作用的保护剂，如乙醇、明胶。图６温度对酶活力的影响
９２２００７年第０７期
研究与探讨
３００酶活力单位（ＩＵ）Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．０７，２００７凝胶过滤层析，能够从豆豉粗酶液中提取纤溶酶。分离后的纤溶酶在２８０ｎｍ下有两个紫外吸收峰，在２５０２００１５０１００５００对照
氯化钠
亚硫酸钠
蛋白胨
乙醇
甘油
明胶
海藻酸钠
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳中有一个活性峰呈单一条带，分子量为３５ｋＤａ，活性回收率为２２．５％，纯化倍数为１１．７；另一活性峰呈三条带，需进一步分离。纤溶酶特性研究表明：在ｐＨ７．０左右，温度４０℃时，酶活力最高，高于或低于此ｐＨ、温度时，酶活力均明显降低；该纤溶酶不耐热，其纤溶活性可被明胶对酶Ｍｎ２＋、Ｍｇ２＋以及Ｎａ２ＳＯ３激活，Ｃａ２＋以及乙醇、活力具有较强的抑制作用；ＮａＣｌ浓度低于１０％，酶活力能够基本保持稳定。图９化学物质对酶活力的影响
２．２．６ＮａＣｌ浓度对酶活力的影响在豆豉制作过程中，盐是不可缺少的一部分，因此，研究盐浓度对豆豉纤溶酶活力的影响是必要的，结果如图１０所示。参考文献：
［１］李江伟，冉国侠．豆豉溶栓酶的分离纯化及其体外溶栓作用［Ｊ］．中国生物药物杂志，１９９９，２０（３）：１４８～１５０．［２］王金英，刘宇峰，等．豆豉抗栓作用的研究［Ｊ］．生物技术，１９９７，７（５）：１８～２０．［３］ＡｓｔｒｕｐＴ，ＭｕｌｌｅｒｔｚＳＴ．ＴｈｅＦｉｂｒｉｎｐｌａｔｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｅｓｔｉｍａｔｉｎｇｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．ＡｒｃｈＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ，０．８０．７ＯＤ４１００．６０．５０．４０．３０４８１２１６２０２４１９５２，４０：３４６～３５１．［４］ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙＢａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓＤＣ－４ｓｃｒｅｅｎｅｄｆｒｏｍｄｏｕｃｈｉ，ａｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｓｏｙｂｅａｎｆｏｏｄ［Ｊ］．ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙＰａｒｔＢ，２００３（１３４）：４５～５２．［５］王光利，杨星勇，等．芽孢杆菌纤溶酶的纯化及其生物活性
研究［Ｊ］．西南农业大学学报，２００１，２３（１）：６６～６９．ＮａＣｌ浓度（％）
图１０ＮａＣｌ浓度对酶活力的影响
ＮａＣｌ浓度低于１０％时，豆豉纤溶酶活力基本保持稳定；当ＮａＣｌ浓度高于１０％时，酶活力迅速下降。因此，在豆豉的制作过程中，应保持盐浓度低于１０％，从而保持较高的纤溶活性，使豆豉具有较好的溶栓保健作用。［６］陈丽花．纳豆芽孢杆菌液态发酵制取微生态制剂的研究［Ｄ］．上海：上海水产学院，２００２．３结论
采用饱和硫酸铵溶液分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００表１温度与货架寿命系数的关系
温度（℃）货架寿命系数
（上接第８９页）##############################################［３］ＦｒａｎｋｅｌＥＮ．ＬｉｐｉｄＯｘｉｄａｔｉｏｎ［Ｍ］．ＴｈｅＯｉｌｙＰｒｅｓｓＬｉｍｉｔｅｄ，２２１５１２１６３０３２
１９９８，Ｄｕｎｄｅｅ，Ｓｃｈｏｔｌａｎｄ．［４］ＢｏｕｒｒｅＪＭ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｎｕｔｒｉｅｎｔｓ（ｉｎｆｏｏｄ）ｏｎｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍ：Ｕｐｄａｔｅｏｎｄｉｅｔａｒｙｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ由表１可以看出，用Ｓｃｈａａｌ烘箱法进行氧化稳定性实验，在６２℃储存１ｄ相当于在２２℃室温下贮藏６２１
５２２
４２４
３２８
ｆｏｒｂｒａｉｎ，Ｐａｒｔ２：Ｍａｃｒｏｎｕｔｒｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｔｒｉｔｉｏｎＨｅａｌｔｈ＆Ａｇｉｎｇ，２００６，１０（５）：３８６～３９９．［５］谢守华．油脂的自动氧化和氧化稳定性及检测方法［Ｊ］．四
川粮油科技，１９９８，６０（４）：５３～５５．１６ｄ。若以国标规定的过氧化值１２ｍｅｑ／ｋｇ为上限，据表１和图２所得结果，可以推算出所测７个样品在２２℃下的保质期分别为：样品１，４和５≥７２０ｄ，样品２在６７２～７２０ｄ之间，样品６≤３８４ｄ，样品３在３３６～３８４ｄ之间，样品７在２８８～３３６ｄ之间。因此可见，除样品３，６和７外，其它多不饱和脂肪酸样品的保质期均可延长到两年。［６］周柏玲，李蕾，孙秋雁，等．玉米醇溶蛋白复合膜包衣对核
桃仁酸败抑制效果的研究［Ｊ］．农业工程学报，２００４，２０（３）：１８０～１８３．［７］胡传荣，谷文英．高生育酚抗氧化活性研究［Ｊ］．中国油脂，２００３，２８（６）：３７～４０．［８］赵声兰，李涛，蔡绍芬，等．核桃油自氧化及其抗氧化的实
验研究［Ｊ］．食品工业科技，２００１，２２（２）：２７～２９．参考文献：
［１］王毕妮，张富新，李建科．松籽油的抗氧化稳定性研究［Ｊ］．食品工业科技，２００５（７）：９６～９８．［９］邓鹏，程永通，薛文通．油脂氧化及其氧化稳定性测定方法［Ｊ］．食品科学，２００５，２６：１９６～１９９．［１０］王兴国，裴爱泳，史小华，等．抗坏血酸棕榈酸酯在不同油
品中的抗氧化性能研究［Ｊ］．中国油脂，２０００，２５（３）：５２～５５．２００７年第０７期
［２］Ｋａｍａｌ－ＥｌｄｉｎＡ，ＰｏｋｏｒｎｙＪ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｌｉｐｉｄｏｘｉｄａｔｉｏｎ［Ｍ］．ＡｍｅｒｉｃａｎＯｉｌＣｈｅｍｉｓｔＳｏｃｉｅｔｙＰｒｅｓｓ，２００５，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，ＵＳ．９３
